无创胎儿染色体非整倍体产前检测技术的应用

　　研究发现，孕妇外周血浆中存在胎儿游离 DNA(cffD-NA)，长度在 75bp 和 250bp 之间，平均为 166bp。怀孕 4 周可检出，8 周后含量上升并稳定存在(7 周建立胎儿胎盘循环)，其含量在 5% ～30%之间，能够通过高通量方法稳定检测出来。cffDNA 以核小体形式稳定存在，在分娩后 2h 内快速消失从而不会影响下一胎的检测。因此，可以作为非创伤性产前检测的理想材料。

　　1 资料与方法

　　2012 年 8 月，我院与中国医学遗传中心，湖南家辉遗传专科医院，北京贝瑞和康生物技术有限公司合作开展了“无创胎儿染色体非整倍体产前检测”，2012 年 8 月 － 2013 年 8月，对 257 例孕 13 周 ～ 26 周孕妇外周血进行了胎儿游离DNA 检测。

　　2 结 果

　　检测的 257 例孕妇外周血中，253 例正常，4 例异常。其中:1 例提示 21 － 三体阳性，羊水结果证实(无假阳性，无假阴性)。1 例提示 18 － 三体阳性，羊水结果证实(无假阳性，无假阴性)。1 例提示 13 － 三体阳性，羊水结果正常(有假阳性，无假阴性)。1 例提示母体性染色体异常，对孕妇外周血进行染色体检查，结果为 46，XXX/46，XX(60%∶ 40%)(无假阳性，无假阴性)羊水结果提示胎儿正常。阳性率为1. 56%，灵敏度 99%以上。

　　3 讨 论

　　3． 1 国外临床试验结果:自 1997 年发现母体血液中存在胎儿游离 DNA 之后，无创伤的直接检测胚胎染色体异常成了一个重大的研究课题。2008 年香港中文大学和美国斯坦福大学的研究人员相继发表了应用高通量测序技术从母体血浆 DNA 中检测胎儿 21 三体的论文。2009 年香港中文大学、美国 Sequenom 公司和 Verinata Health 公司先后开展了应用高通量测序方法检测胎儿 21、18、13 号染色体的临床试验。

　　3. 1. 1 香港中文大学于 2011 年 1 月发表于英国医学杂志(British Medical Journal)的文章表明，通过对753 例高危孕妇的血浆 DNA 进行检测，准确检出 86 例唐氏综合征胎儿，灵敏度大 100%，3 例假阳性，无假阴性。

　　3. 1. 2 Sequenom 公司的临床结果于 2011 年 3 月发表于AJOG，该机构对 449 例高危孕妇的血浆 DNA 进行了检测，准确诊断出 39 例 T21 样本，1 例假阳性，无假阴性，与香港中文大学的结果非常相似。

　　3. 1. 3 Verinata Health 公司的临床结果于 2011 年 4 月发表于Clin Chem，该研究对 119 位孕妇的血浆 DNA 进行了检测，结果证明可对 T21 和 T18 同时检测，并且无假阴性和假阳性出现。

　　3. 1. 4 香港中文大学又于 2011 年 7 月发表临床研究结果于 PLOS ONE，该临床研究对 392 位孕妇血浆 DNA 进行了检测，进一步揭示并证明了同时检测 T21、T18、T13 的可行性。

　　3． 2 国内临床试验结果:2010 年湘雅医院产前诊断中心、国家医学遗传学重点实验室、湖南家辉遗传专科医院与北京贝瑞和康生物技术有限公司合作进行一期临床试验———大规模基于新一代测序技术的新型无创 DNA 产前检测临床研究，该临床研究的样本是湘雅医院从 2007 年严格收集并可以用于深度测序的孕妇血浆样品。按照国际标准，应用自主创新研发的无创 DNA 产前检测技术体系，于 2007 年 7 月完成了 401 例临床样本即母体外周血游离 DNA 的高覆盖度测序，准确检出 28 例 T21 胎儿(无假阴性，无假阳性);12 例T18 胎儿( 无假阴性，无假阳性);3 例 T13 胎儿( 无假阴性，无假阳性);6 例 XO 胎儿(无假阴性，2 例假阳性);1 例 XXX胎儿，1 例 XXY 胎儿。临床试验结果得出，利用该技术对 5大染色体的检出率达 100%。

　　3． 3 我院开展无创胎儿染色体非整倍体产前检测，对 257例孕13 周—26 周孕妇外周血进行了胎儿游离 DNA 检测。检出结果253 例正常，4 例异常。阳性率为1．56 %，灵敏度99%以上。今后，随着样本量的扩大，其结果更具有统计学意义。

　　3． 4 该技术适用于孕 12 周以上的单胎孕妇，尤其适合于存在以下情况者:病毒携带者、有流产史、T21 生育史、心理压力大、胎盘前置、孕囊低置、羊水过少、孕妇 Ｒh 血型阴性、胎儿为珍贵儿。

　　无创胎儿染色体非整倍体产前检测技术是 20 多年来基因组学首个真正意义上能够进入临床应用领域的创新性突破。这项技术有效规避了感染和流产带来的风险，并可极大地降低孕妇及其家属的心理负担，代表了当前产前检测和防止先天性缺陷儿出生的最新发展方向。进而为临床疾病检测提供更全面更优质的服务。随着基因组测序技术、DNA 芯片技术的进一步完善，在未来的 5 年内可望建立一个以全基因组测序和 Array 检测为核心，以染色体 G 显带、FISH 等技术为辅的遗传病诊断和产前诊断的高技术平台，填平从基因病→基因组病→染色体病的技术鸿沟。

　　参 考 文 献
　　
　　［1］Chin，Dennis Lo，et al． Noninvasive prenatal diagnosis of fetal chro-mosomal aneuploidy by massively parallel genomic sequencing of DNAin maternal plasma［J］． PNAS，2008，105∶ 51．
　　［2］Fan，Quake，et al． Noninvasive diagnosis of fetal aneuploidy by shot-gun sequencing DNA from maternal blood［J］． PNAS，2008．
　　［3］Chiu，Dennis Lo，et al． Maternal Plasma DNA nalysis with MassivelyParallel Sequencing by Ligation for Noninvasive Prenatal Diagnosis ofTrisomy 21［J］． Clinical Chemistry，2010，56∶ 3．
　　［4］无创胎儿染色体非整倍体产前检测项目介绍． 湖南家辉遗传专科医院，北京贝瑞和康生物技术有限公司，2012．1 －9．
　　［5］新一代测序技术在遗传病诊断中的应用［C］． 第十二次全国医学遗传学学术会议论文汇编，2013．4 －7．收稿日期:201