流动相改性剂全面覆盖尿液代谢物检测的有效策略(3)

　　2. 5 3 种流动相改性剂检测到离子的响应强度和分辨率。
　　
　　尿液中含有不同极性的成分，包括氨基酸、有机酸、脂肪酸、脂类代谢物、糖类和大量的次生代谢产物。因此，提高这些小分子代谢物在色谱柱中的保留和灵敏度对于代谢组学研究是非常重要的。
　　
　　图 5 显 示，在 正 离 子 模 式 下，质 荷 比 m/z 为225. 116 ± 0. 05Da 的离子在 3 种不同流动相中的保留时间和响应强度是不同的。在流动相中加入甲酸后，该离子的保留时间在 15. 89 min,且响应强度分别是甲酸铵和乙酸铵流动相的 2 倍和 7 倍。正离子模式下其他的离子在这 3 种流动相下也出现了类似的现象，在负离子模式下却不明显。
　　 　　
　　研究发现，在正、负离子模式下，分别添加了甲酸和乙酸铵的流动相能提高离子的分辨率。结果如图 6 所示，m/z 为 367. 145 的离子在甲酸铵流动相中保留时间为 1. 78 min（ 6a） ,在乙酸铵流动相中的保留时间为 1. 88 min（ 6b） ,在甲酸流动相中被拆分成两个色谱峰，保留时间分别为 1. 62 min和2.62 min.图6 中所示的数据清楚地说明，在甲酸流动相中得到的两个色谱峰是两个同分异构体构成的。高分辨率不仅对代谢组学研究是有益的，而且在代谢产物的鉴定方面是非常重要的。
　　 　　
　　3 结论。
　　
　　本研究对比了 3 种流动相改性剂对尿液整体代谢轮廓的影响，我们发现在正、负离子模式下，在流动相中添加甲酸和乙酸铵会提高尿液代谢轮廓中代谢物的覆盖率，可以检测到更多的离子。而且，会提高离子响应强度和分辨率。相反，在正、负离子模式下，在流动相中添加乙酸铵和甲酸铵，会使离子响应强度分别降低 10 倍和 50 倍。这项实验结果已经应用于壬基酚暴露对大鼠体内代谢物影响的研究中[12],并且为后续从更全面的代谢轮廓中发现生物标志物打下了基础。
　　
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