流动相改性剂全面覆盖尿液代谢物检测的有效策略(2)

　　2. 2 色谱峰数分析。
　　
　　在 2. 1 节中确定的 HPLC-QTOF-MS 方法中水相 流 动 相 中 分 别 添 加 0. 1% 甲 酸 （ V ∶ V） 、10 mmol / L甲酸铵、10 mmol / L 乙酸铵对大鼠尿液样品进行分析，分别釆用正、负离子的全扫描模式，获得的总离子流色谱图见图 2.结果表明： 在正、负离子模式下，在不同流动相改性剂的作用下，色谱保留时间分布是不同的。在图 2a 中，正离子模式中，在流动相中添加 10 mmol/L 甲酸铵时，色谱峰主要分布在 0 ~ 35 min; 而在流动相中添加 10mmol / L 乙酸铵时，色谱峰主要分布在 0 ~ 15 min和 30 ~ 43 min之间； 在流动相中添加 0. 1% 甲酸时，色谱峰均匀地分布在整个洗脱过程中，而且响应强度也要高于另两种流动相改性剂。在图 2b中，负离子检测模式下，添加 10 mmol/L 乙酸铵时，色谱峰个数最多，响应强度最高。此外，对不同流动相改性剂条件下的色谱峰个数进行统计，结果见图 2c,在正负离子模式下，在甲酸和乙酸铵作为流动相改性剂时的色谱峰个数明显多于甲酸铵，且差异显着； 在正离子模式下，甲酸流动相峰个数多于乙酸铵流动相，且差异显着； 在负离子模式下，甲酸流动相对乙酸铵流动相差异不显着。
　　 　　
　　2. 3 离子数分析。
　　
　　用 MarkerView 软 件 （ 1. 2. 1. 1 版 本） 统 计HPLC-QTOF-MS 采集到的原始数据，将 3 种流动相在正负离子扫描模式下获得的离子分别计数。结果如图 3 所示，图 3a 表示在正离子模式下，流动相中添加甲酸、甲酸铵和乙酸铵中检测到的离子的总数分别为 1452,1197 和 714; 这 3 种流动相检测到的独有离子数分别为 298,79 和 45.图 3b 表示在负离子模式下，流动相中添加甲酸、甲酸铵和乙酸铵中检测到的离子的总数分别为 636,593 和 947;检测到的独有离子数分别为 1,3 和 217.结果表明，在正、负离子模式下，在流动相中分别添加甲酸和乙酸铵后检测到的离子数目最多，其中独有的离子数也是最多。
　　 　　
　　2. 4 3 种流动相改性剂检测到的离子特点。
　　
　　用 SPSS Statistics 软件（ 17. 0 版本） 统计添加不同流动相改性剂后 HPLC-QTOF-MS 采集到的离子的质荷比范围。结果如图 4 所示，在正离子模式下（ 图 4a） ,3 种流动相可以检测到的代谢物质荷比范围为 m/z 287. 979 ±112. 0279; 流动相中添加甲酸、甲酸铵和乙酸铵后检测到的离子的质荷比范围分别为 m/z 340. 0488 ± 125. 7661,264. 1395 ±94. 1348 和 255. 5317 ± 73. 8793.添加甲酸后检测到离子的质荷比范围最广。在负离子模式下（ 图4b） ,流动相中添加甲酸、甲酸铵和乙酸铵后检测到的离子的质荷比范围为 555. 838 ± 357. 4551,405. 5862 ± 186. 3254 和 471. 570 ± 186. 8783,没有显着差异。