四氯化碳致肝损伤犬类喂食复方甘草酸苷片的效果探究

　　
　　肝脏是动物体最重要的器官，它是物质合成与代谢、能量产生与转换的重要枢纽，但其暴露在有害条件下可引起肝损伤，进一步形成肝纤维化，最后发展成肝硬化和肝癌，肝损伤对犬只的危害十分巨大，本文探究复方甘草酸苷片对犬四氯化碳致肝损伤的有效性和安全性，为其进一步的临床应用提供理论依据。
　　
　　首先为了探索适合的造模条件，选择 50%CCl4油溶液分 3 个剂量组进行造模实验，分组为：空白对照组、0.5mL/kg 组、1.0mL/kg 组、2.0mL/kg 组。结果显示，1.0mL/kg 组的结果合适。 　　
　　在上述模型的基础上，对复方甘草酸苷片的有效剂量进行筛选，将 80 只实验用犬分为8 组，分组为：空白对照组、0.625 mg/kg 组、1.25 mg/kg 组、2.5 mg/kg 组、5.0 mg/kg 组、10 mg/kg 组、安慰剂组、阴性对照组。通过进行临床表现评分和生理生化指标检测，结果显示，2.5 mg/kg 的复方甘草酸苷片用量，一天 2 次，连用 7 天，对犬四氯化碳肝损伤模型具有最佳的治疗效果。
　　
　　最后考察复方甘草酸苷片对靶动物犬的安全性，以临床推荐剂量的 1、3、5 倍剂量的复方甘草酸苷片对犬进行给药，连用 15 天，进行血常规、血液生化、血气离子的检测和尿常规检查，试验结束后剖检检查脏器变化，并制作病理组织学切片，来进行综合考察。结果显示，1、3、5 倍剂量的复方甘草酸苷片未能引起犬只的死亡和其他毒性反应，各项血清学指标和血清生化指标未见异常，病理组织学观察各组织脏器也未见不良影响。表明复方甘草酸苷片在临床上对犬有着较高的安全性。
　　
　　关键词：　复方甘草酸苷片，肝损伤，四氯化碳，丙氨酸氨基转移酶。
　　 　　
　　The liver is the most important organ of the animals, which is an important hub of material synthesis and metabolism, energy generation and conversion. But its exposure to harmful conditions can cause liver damage, further forming liver fibrosis, and eventually developing cirrhosis and liver cancer. Because liver injury is very harmful to dogs. In this paper, the efficacy and safety of compound glycyrrhizin tablets in treating liver injury caused by carbon tetrachloride in dogs were investigated, providing theoretical basis for its further clinical application.
　　
　　First, in order to explore suitable modeling conditions, 50%CCl 4 oil solution was selected for modeling experiments in three dose groups, which were divided into: blank control group,0.5mL/kg group, 1.0mL/kg group, and 2.0mL/kg group.The results showed that the results for the 1.0mL/kg group were appropriate.
　　
　　Based on the above model, the effective dose of compound glycyrrhizin tablets was screened,and 80 experimental dogs were divided into 8 groups: blank control group, 0.625 mg/kg group,1.25 mg/kg group, 2.5 mg/kg group, 5.0 mg/kg group, 10 mg/kg group, placebo group, and negative control group.The results showed that 2.5mg /kg of compound glycyrrhizin tablets, twice a day for 7 consecutive days, had the best therapeutic effect on the canine model of liver injury caused by carbon tetrachloride.
　　
　　Finally this paper makes a research on the compound glycyrrhizin glucoside piece target animal safety, clinical recommendations on the dosage of 1, 3, 5 times the dose of compound glycyrrhizin glucoside piece of dog, stay 15 days, blood routine, blood biochemistry, blood gas ion detection and urine routine examination, test after the autopsy examination organs, and made pathological histology slice, to carry out comprehensive inspection.The results showed that 1, 3, 5 times the dose of compound glycyrrhizin tablets failed to cause the death of dogs and other toxic reactions, there were no abnormalities in serological indicators and serum biochemical indicators,and no adverse effects were observed in the organs of various tissues by histopathological observation.The results showed that compound glycyrrhizin tablets were safe for dogs.
　　
　　Key Word：　　compound glycyrrhizin tablets， hepatic injury， carbon tetrachloride， alanine transaminas。
　　 　　
　　肝脏最重要的作用是解毒和物质代谢，对许多药物，毒物及代谢产物具有生物转化作用。肝脏的生物化学反应分为 4 种形式：分别为氧化反应、还原反应、水解反应和结合反应。由于这些反应的存在，才使得机体维持内环境稳态，保持身体健康。
　　
　　由于肝脏的生物化学反应存在，当药物吸收入体以后，药物自身或其代谢产物对肝脏造成影响，或者机体自身对药物的超敏反应，使得肝脏受到损伤，目前我们在生活中能接触到的药品和保健品的种类超过 30000 种，而其中有超过 1000 种会引起肝损伤，所以肝损伤已成为一个不容忽视的公共卫生问题[1]。
　　
　　在我国，随着动物主人科学养宠知识的提高、免疫制度的健全和完善、动物专用日粮的普遍接受使用，劣性传染病大幅减少，在这种情况下，犬只自身的一些疾病，如肥胖症、糖尿病、心脏病都可能继发肝损伤，另外一些细菌、寄生虫、病毒感染也会导致该病发生，但是引发该病最密切的还是食物和药物的有毒物质，所以肝损伤也成为威胁犬类健康的一大杀手。根据国内外研究显示，肝损伤是引起犬只死亡的主要疾病之一。大多数的犬类病例都很难准确找出病因，治疗措施通常采用非特异的对症治疗为主，预后评估也不确实。
　　
　　甘草是应用广泛的传统中药材。1948 年发现其有效成分为甘草酸，随后研发了其系列铵盐及各种金属盐，即甘草酸类药物，诸多研究已证实其有抗炎、抗氧化、保护细胞膜、抗纤维化等肝脏保护作用。复方甘草酸制剂由甘草酸单铵、甘氨酸和蛋氨酸组成，1948 年最早由日本米诺发源制药株式会社生产（商品名：美能），上市剂型有注射剂和片剂，1958年尝试用该药治疗肝病，1985 年我国始用甘草酸类药物治疗慢性肝炎，1990 年首届甘草酸学术会议得到了进一步确认，已是目前人医学临床上最常用的保肝药[2]。针对犬肝损伤的治疗，因缺乏临床研究，国内外尚无指南提供明确参考，而一些甘草酸制剂对其有很好的效果与疗效，本实验旨在探究复方甘草酸苷片对犬四氯化碳肝损伤的安全性和有效性。
　　 　　
　　第 1 章 肝损伤。
　　
　　1.1 肝脏简介。
　　
　　肝脏是动物体内脏中最大的脏器[3]，在腹腔的右上部，肝脏大部分都被肋弓所覆盖，正常的肝脏是红褐色的，质地较为柔软，重量约为生物体重的 2%左右。肝脏是一个可以更新失去组织的器官，在失去约 25%的肝组织之后，剩余的肝组织仍能再生成为一个完整的肝脏。肝脏具有生物转化的作用，可以对某些体内和体外的物质如各种药物、毒物以及体内某些代谢产物起作用。肝脏可将它们分解或者以整体的形式排出体外。此过程为解毒功能，即将一些毒物转变为无毒或者仅有一点毒性，并且容易排出体外；肝脏最常见的代谢方式是，将水溶性的物质从尿和胆汁中排出；肝脏经过一系列作用，把脂溶性的物质转化为水溶性物质，再排出[4]。
　　
　　1.2 药物性肝损伤。
　　
　　药物性肝损伤是指药物或者它的代谢物使得肝功能发生变化，或者肝脏对药物及它的代谢产物的超敏反应所引发的疾病，出现类似急、慢性肝炎的症状，但其中 90%是急性的，据鲍中英[5]的报道可知，我们接触的药品及一些保健品总共 3 千多种是可以引起肝损伤的，加之一些食品添加剂还有可污染环境的物质，总量超越 6 万种。刘玲[6]在报道中也指出在美国，肝脏衰竭病患的 50%是药物性肝损伤患者，而在我国，药物性肝损伤也占据了 15%~30%，在所用药物超过用量时或者在正常用量的时候，都是可能出现肝损伤的，通常会在用药后的5～90d 内发生。程度较重的肝损伤会继发很多疾病，甚至会出现死亡[7]。
　　
　　药物性肝损伤是不容忽视的问题，其实际发生率远大于它的影响力。调查显示，各类药物几乎都可引发药物性肝损伤，市面上已有上千种药物存在潜在的肝毒性。世界上药物不良反应引起的发病率达 4.2%~22.1%，我国急性肝损伤病例中药物性肝损伤占 10%左右[8]。肝脏是机体内药物代谢的重要场所，大多数的药物被机体摄入后会通过肝脏进行分解、转化等，即肝脏解毒机制。药物在体内发挥作用的同时，也会由于分子结构或属性的改变对肝脏产生一定的影响，导致正常功能或结构发生改变，引起肝损伤，所以，肝脏是不可避免的最易受药物伤害的器官之一。药物性肝损害表现在两大方面，即药物本身固有毒性和机体对药物的特异性反应药物的固有毒性一般存在剂量依赖化与药物过量或体内蓄积中毒有关，机体在用药后会经过一段潜伏期发生肝损伤，是可以预测的；而机体对药物的特异性反应与机体的遗传素质有密切的相关性，一般情况是无法直接预测的。
　　
　　1.2.1 肝损伤的诊断。
　　
　　目前就肝损伤的诊断没有公认的标准，杨芳明[9]指出应检测病患的转氨酶和胆红素来判断，而这种诊断也有一定的偏差，即组织学显现的结果往往重于实验室检查结果，目前最广泛的标准是 RUCAM 评分表，不过其也有一定局限性。而胡琴[10]指出，发生肝功能异常的时候，应结合用药史，停药后反应及再用药的的反应来综合判断，同时他也指出 RUCAM评分表存在不足，仍要完善来提高准确率。所以其诊断仍需要进一步加强。肝功能指标是肝脏损伤的敏感指标，但很难准确地反映损伤程度。查不出代偿期肝硬化，失代偿期肝硬化也预测不准。黄崇军[11]发现在肝硬化患者中的阳性率仅为 21.79%。徐邦宁[12]报导丙氨酸氨基转氨酶（ALT）和天冬氨酸氨基转氨酶（AST）只有在进行性肝硬化时才升高。张亚莉[13]研究发现肝硬化组 AST 的阳性率为 75%，ALT 的阳性率为 50%。胡章良[14]也发现 ALT、AST、白蛋白（ALB）和胆红素（TBIL）的水平对肝硬化分级均无显着相关性。吉鸿[15]在研究中发现 ALT 能敏感反映急性肝损伤，但其变化与肝切除率无明显相关；总蛋白（TP）和碱性磷酸酶（ALKP）不是反映肝储备功能的敏感指标，只能在一定程度上反映肝储备功能。血装蛋白是血浆中多种蛋白质的总称，统称 TP，包括白蛋白、球蛋白、酶、蛋白质激素和凝血因子等，大多在肝脏中合成。血浆蛋白对渗透压的维持十分重要。肝脏发生疾病时，血浆蛋白的含量会发生一定程度的变化，如在慢性肝炎时，球蛋白的含量多数是升高的，而 ALB 的浓度多数情况下降低，TP 的变化可能不变或者降低。这说明 TP 对肝脏疾病不敏感。ALB 的合成场所主要是在肝脏，半衰期为 15-19 天。在肝组织功能损失70%以上时，肝组织损伤程度严重，ALB 合成能力降低，会出现低蛋白血症，如脂肪肝等弥漫性肝病。换言之，在急性肝损伤、肝硬化早期等疾病时，ALB—般无变化。同时外出血、肾病、肠病、烧伤等很多因素都有可能引起低蛋白血症，所以 ALB 对严重的肝病具有很高的敏感性，但不具有特异性。
　　 　　
　　1.2 药物性肝损伤
　　
　　第 2 章 甘草酸制剂的综述
　　
　　2.1 甘草的主要功用
　　2.2 甘草酸制剂在人的各种类型的肝病中的使用
　　2.3 甘草酸制剂药理作用研究进展
　　2.4 甘草酸制剂在兽医领域的临床研究
　　
　　第二篇 研究内容
　　
　　第 1 章 犬四氯化碳肝损伤模型的建立
　　
　　1.1 材料与方法
　　1.2 结果
　　1.3 讨论
　　1.4 小结
　　
　　第 2 章 复方甘草酸苷片有效剂量的筛选
　　
　　2.1 材料与方法
　　2.2 疗效判断指标与标准
　　2.3 数据统计分析
　　2.4 结果
　　2.5 讨论
　　2.6 小结
　　
　　第 3 章 复方甘草酸苷片对靶动物犬安全性的评价
　　
　　3.1 材料与方法
　　3.2 观察指标
　　3.3 结果数据统计与分析
　　3.4 讨论
　　3.5 小结

　　结 论

　　1、1.0mL/kg 的 CCl4 油溶液一次性腹腔注射，适用于犬肝损伤造模。

　　2、试验证明每次 2.5 mg/kg 复方甘草酸苷片的给药剂量，一天 2 次，连用 7 天，对犬四氯化碳肝损伤模型具有最佳的治疗效果。

　　3、复方甘草酸苷片按临床推荐剂量的 1～5 倍量范围内应用于犬是安全的。

　　参考文献