1. 2. 3 TUNEL 实验： 取 4% 多聚甲醛固定后的 4 组细胞滴片，冷风吹 4 h,0. 3% Triton X-100/PBS 透化后，37 ℃蛋白酶 K 消化 8 min,TdT（ 末端脱氧核苷酸转移酶） 缓冲液，1 μL TdT 酶及 1 μL Bio-dUTP/玻片，置于湿盒 37 ℃ 1. 5 h.BCIP/NBT 底物显色，甲基绿复染。阴性对照实验不加 TdT 酶。每组细胞滴片选取 10 个视野，计数 500 个细胞，计算阳性细胞所占百分比即各组细胞凋亡率。
1. 2. 4 免疫组化： 4% 多聚甲醛固定后的细胞标本，加入 0. 3% Triton X-100/PBS 透化后，加 10% 正常的羊血清封闭，除多余血清，加 1∶ 100 稀释的各种一抗置 4 ℃湿盒内孵育过夜。PBS 洗后，加 1∶ 200 稀释的二抗（ 鼠 IgG-HRP） ,置37 ℃湿盒内孵育1. 3 h,以 DAB 显色。阴性对照实验用 PBS 代替一抗，应用图象分析仪扫描各标本免疫印迹信号的吸光度值A,即各相关蛋白表达量。
1. 2. 5 Western blot: 应用有机溶剂萃取方法提取蛋白。制备 SDS-PAGE,电泳条件 85 V、1. 5 h.电转仪 4 ℃下转到硝酸纤维素膜上，将硝酸纤维素膜与1∶ 100 稀释的各种一抗反应 2 h,再与 1∶ 200 稀释的二抗室温下反应 1 h.加入底物显色，以 β-actin 为内参照，阳性条带出现棕色后终止反应，应用薄层层析扫描仪进行扫描。
1. 2. 6 动物实验： SPF 级雄性 Wistar 大鼠，体质量210 ~ 250 g,分为对照组及大和小剂量实验组，分别给予蒸馏水及35 和15 mg/kg 维生素 E 溶液2 mL灌胃 3 次，间隔 12 h.在灌胃前和后 3 及 6 d 取血，分离血浆，检测大鼠血浆中 T-AOC、SOD、MDA 和 GSH的含量，严格按各试剂盒说明进行。
1. 3 统计学分析用 SPSS 16. 0 软件进行统计学分析，各组数据均用均值和标准差（ x ± s） 表示，进行单因素方差分析，对细胞的存活率和凋亡率应用 χ2检验。
2 结果。
2. 1 细胞实验结果。
2. 1. 1 细胞存活率和凋亡率： H2O2损伤组较对照组存活率下降而凋亡率升高（ P < 0. 01） ,维生素 E干预组显着减轻上述变化（ P <0. 01） （ 图 1） .
2. 1. 2 维生素 E 保护对人 RBL 肝细胞相关蛋白表达水平的影响： H2O2损伤组 （ Ec） Bax、Hsp-70、NF-κB及 caspase-3 显着升高（ P < 0. 01） ,而 Bcl-2 显着下降（ P <0. 01） ,维生素 E 干预后能显着缓解上述变化（ P <0. 01） ,H2O2损伤前干预效果优于后干预（ 表 2） .
2. 1. 3 Western blot 检测维生素 E 对人 RBL 肝细胞相关蛋白表达水平的影响： H2O2组较对照组，Hsp-70、NF-κB 和 Bax 的表达水平明显增高 （ P <0. 01） .Eb 组 / Ea 组上述指标明显降低（ P < 0. 01）（ 图 2） .
