摘要： 目的探讨维生素 E 在体内外的应激损伤。方法 体外实验： 人肝 RBL 细胞系根据 H2O2损伤及损伤前后给予维生素 E 分为 4 组，对照组（ C） 、H2O2损伤组（ Ec） 、H2O2损伤前（ Eb） 及后（ Ea） 给维生素 E 组； 体内实验： 将 20只清洁级雄性 Wistar 大鼠分为对照组和大及小剂量维生素 E 组，每天进行一次 35 和 15 mg/kg 溶液 2 mL 灌胃，连续 3 d.体外实验应用 MTT 和 TUNEL 法检测细胞存活率和凋亡率，免疫印迹和免疫组化方法检测细胞中 NF-κB、Hsp-70、Bcl-2、Bax 及 caspase-3 的表达水平； 体内实验应用生化法检测 3 和 6 d 后血浆内 T-AOC、SOD、GSH 和 MDA的水平。结果 H2O2损伤组（ Ec） 细胞凋亡率增加（ P < 0. 01） ,细胞内 Bax、Hsp-70、NF-κB 及 caspase-3 显着升高（ P <0. 01） ,而 Bcl-2 显着下降（ P <0. 01） ,维生素 E 干预后能显着缓解上述变化（ P < 0. 01） ,H2O2损伤前干预效果优于后干预。灌胃后 3 d 血浆中 T-AOC、SOD、GSH 的水平增高，MDA 降低（ P <0. 01） ,6 d 后其相关指标变化更加显着（ P <0. 05） .结论 维生素 E 可通过调节人肝 RBL 细胞相关蛋白表达水平和 Wistar 大鼠血浆中抗氧化酶体系而发挥抗氧化作用。
关键词：维生素 E; H2O2; 抗氧化酶体系； 抗凋亡信号传导。
Abstract: Objective To explore the antioxidant effect of vitamin E on both in the rat in vivo and in hepatic RBLcells in vitro. Methods The cultured human hepatic RBL cells were exposed to H2O2as an oxidant and treated with0. 4mM doze of Vitamin E before or after exposure of H2O2. The cell survival and apoptosis were detected by MTTand TU-NEL assays. The expression level of NF-kB,Bcl-2,Bax,Hsp-70 and caspase-3 was determined by immuno-histochmistry and Western blot. 20 clean level male Wistar rats were divided into control group and the big andsmall doses of vitamins E35 and 15 mg / kg 2 mL lavage solution,1 time a day,a total of three times,the biochemicalmethod was performed to detect within the plasma after 3 and 6 d T-AOC,SOD,GSH and MDA levels.Results H2O2damage group （ Ec） apoptosis rate increased （ P < 0. 01） ,intracellular Bax,HSP-70,the NF-kappaB and caspase 3 significantly higher （ P < 0. 01） ,while the Bcl-2 decreased significantly （ P < 0. 01） ,vitamin E af-ter the intervention can significantly alleviate the above changes （ P < 0. 01） ,H2O2damage before intervention wasmilder than that after intervention. Lavage after 3 d plasma T-the AOC,SOD,higher level of GSH,MDA lowered（ P <0. 01） ,and 6 d after the relevant index change was more significant（ P <0. 05） . Conclusions The resultsshowed that the vitamin E displays anti-oxidant capacity through upregulating the antioxidant enzyme system andregulating the expression of relevant proteins.
Key words: vitamin E; hydrogen peroxide; anti-oxidant enzyme system; anti-apoptoic signal transduction.
氧化应激包含反应氧族 ROS 和反应氮族 RNS,两者皆可呈现双重作用，过度氧化应激致使线粒体电子传递链 ROS/RNS 的过量积累损伤细胞的类脂和 DNA 等[1].本课题组曾研究并证明金银花对大鼠体内外具有抗氧化作用[2].维生素 E 在体内可保护细胞不受氧化剂的损害[3],在体外实验中，能够抑制炎症反应、细胞黏附和平滑肌细胞增殖等[4].
维生素 E 是通过细胞信号传导和基因调节发挥其生物学作用[5-7].而近期研究又发现维生素 E结合蛋白具有受体功能的作用。尽管有如此多的发现，但对于维生素 E 的作用机制探讨较少[8].对维生素 E 的分子事件进行深入研究，有助于临床干预。本研究目的将从体内外两个方面探讨维生素 E抗氧化应激损伤的作用效果和作用机制。
1 材料与方法。
1. 1 材料。
1. 1. 1 细胞： 人肝 RBL 细胞系（ 广州医科大学细胞库） .大鼠： 清洁级雄性 Wistar 大鼠，体质量 210 ~250 g[北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号 SCXK（ 京） 2010-2011].
1. 1. 2 试剂： 维生素 E 注射液（ 上海第九制药厂） ;胎牛血清； DMEM （ Sigma 公司） ; TUNEL 试剂盒（ Promega 公司） ; 单克隆抗体 （ Invitrogen 公司） ;T-AOC、SOD、GSH、MDA 试剂盒（ 南京建成生物工程研究所） .
1. 2 方法。
1. 2. 1 实验细胞分组及处理： 人肝 RBL 细胞根据H2O2损伤及损伤前后给予维生素 E 分为4 组，对照组（ C） 、H2O2损伤组（ Ec） 、H2O2损伤前（ Eb） 及后（ Ea） 给维生素 E 组，如表 1.
1. 2. 2 MTT 检测： 制备 5 × 104/ mL 细胞悬液，接种于 96 孔板，每孔细胞悬液加 200 μL.24 h 后分组，（ 每组做 5 个平行孔） 加入不同浓度的维生素 E 和H2O2溶液培养 24 h.每孔加 20 μL MTT,培养 4 h.弃去上清液，加 DMSO 200 μL/孔，震荡器上充分震荡溶解。在酶标仪上490 nm 波长处读取 A 值，取平均值。细胞存活率 = 处理组 A/对照组 A ×100%,抑制率 = （ 1 - 处理组 A/对照组 A） ×100%.
