比较ELISA和TRUST梅毒检测方法的敏感性和特异性

　　梅毒 (syphilis) 是由苍白螺旋体(Treponemapallidum,TP)(又称梅毒螺旋体)引起的一种性传播疾病,可侵犯皮肤黏膜及神经、心血管、骨骼等组织器官,引起慢性病变.近年来,我国梅毒的患病率呈逐渐上升趋势,筛选一种高敏感性和特异性的血清学检测方法,对于梅毒的诊断和治疗具有重要的现实意义.同时,区县疾控中心每年开展哨点监测工作,包括艾滋病、梅毒以及丙型肝炎检测,从而监测本区县性病门诊、吸毒人群等特定人群的梅毒流行状况,哨点监测的梅毒检测通常采用酶联免疫试验 (ELISA) 和梅毒甲苯胺红不加热血清试验 (TRUST) 的试剂组合来筛查梅毒.本文通过对2013 年 801 份哨点监测梅毒检测数据的回顾性分析,来比较 ELISA和 TRUST 这两种检测方法的敏感性和特异性.

　　1 材料和方法

　　1.1 研究对象

　　2012 年闸北区哨点监测样本 801 份.用枸橼酸钠抗凝管采集性病门诊、吸毒人群全血 2mL~3mL,采血后立即颠倒混匀 8 次,离心后取血浆1.2ml留存待检测.

　　1.2 试剂与仪器

　　TRUST 试剂盒由北京金豪制药股份有限公司提供,Anti-TP(ELISA) 试剂盒由珠海丽珠试剂股份有限公司提供,梅毒螺旋体明胶凝集实验 (TPPA)试剂盒由日本富士瑞必欧株式会社提供.酶标仪用Anthos 2010 酶标仪,全自动洗板机用宝特 ELX-50,梅毒振荡仪用 TY2D-Ⅲ.

　　1.3 方法

　　所有标本均采用 TPPA、Anti-TP (ELISA)、TRUST 法进行梅毒螺旋体抗体检测.具体操作方法严格按照试剂盒说明书进行操作,并在有效期内使用,结果判定依据试剂盒规定标准.

　　1.4 统计学处理

　　应用 SPSS10.0 统计软件处理实验结果.

　　2 结果

　　2.1 两种方法检出情况

　　在 801 份标本中,经 TPPA 确认后检测出 92份阳性标本,阳性率 11.49%;Anti-TP (ELISA) 检出 90 例阳性,阳性率为 11.24%;TRUST 检出 53例阳性,阳性率为 6.62%.两种检测方法比较,Anti-TP (ELISA) 的阳性率高于 TRUST,与 TPPA接近.Anti-TP (ELISA) 的假阳性率为 0.12%,TRUST 的假阳性率为 0.25%.Anti-TP (ELISA) 检测假阳性率低于 TRUST 法.见表 1.

　　2.2 两种检测方法比较的评价

　　TRUST 检测特异度较高,为 96.36%,灵敏度较差为 57.61%,Youden 指数为 0.54;Anti-TP(ELISA) 检测法的特异度更高,为 98.90%,灵敏度较高为 97.83%,Youden 指数为 0.97.综合来看,Anti-TP (ELISA) 法的灵敏度和特异性均高于TRUST 法,与 TPPA 结果接近.见表 2.

　　3 讨论

　　梅毒是由梅毒螺旋体引起的慢性传染病,几乎可侵犯全身各器官,早期传染性强,主要侵犯皮肤粘膜,常表现为生殖器溃疡、淋巴结肿大及全身皮疹.晚期破坏性大,常引起心血管系统及神经系统损害.该病主要通过性接触传染,少数通过输血、污染的生活用具传染;患梅毒的孕妇还可传染胎儿,引起流产、早产、死产及娩出先天梅毒儿.目前,区县疾控中心每年开展哨点监测工作,包括对梅毒的检测.该项目主要监测区县性病门诊、吸毒人群以及孕产妇等特定人群的梅毒流行状况.哨点监测中的梅毒检测通常采用 ELISA 和 TRUST 的试剂组合来筛查梅毒.因此,做好这两种梅毒检测方法在哨点检测中的运用效果分析,对于防控和治疗梅毒具有重要的意义.

　　梅毒螺旋体感染后机体可产生特异性的梅毒螺旋体抗体,TPPA可检测血清中梅毒特异性抗体,灵敏度高特异性好.同时,梅毒螺旋体感染后,此抗体可在体内持续存在,检测结果不随病情发展和治疗而变化[1],故 TPPA作为梅毒的检测方法对各期梅毒的检测结果都有较好的稳定性,不易出现假阳性反应.因此,本次研究使用 TPPA作为金标准来评价 Anti-TP(ELISA) 和 TRUST 的检测结果.

　　TRUST 采用 (VDRL) 纯化的心磷脂、卵磷脂,胆固醇配制的 VDRL 抗原重悬于含甲苯胺红的特制溶液中制成,梅毒患者血清中存在能与 VDRL抗原发生凝集反应的反应素,当待测样本中存在反应素时,即与其发生凝集反应,出现肉眼可见的粉红色凝块,反之则无凝块出现[2].TRUST 试验检查的是人体内的反应素,是一种非特异性类脂质抗体.人体在某些生理状态,如怀孕时,TRUST 可以出现假阳性;患有隐性传染病,如风疹、水痘、病毒性肝炎、上呼吸道感染、肺结核、肺炎、亚急性细菌性心内膜炎等疾病时,TRUST 也可以呈假阳性;许多慢性病,如类风湿性关节炎、SLE、风湿性心脏病、肝硬化、干燥综合征、慢性胃炎和海洛因成瘾等,TRUST 同样可以呈假阳性.该方法操作简便,试剂价格便宜,反应快,不需要特殊仪器设备,方便测定梅毒抗体滴度,其滴度变化与梅毒治疗情况呈正相关,该法最适用于临床医生对梅毒性疾病的疗效观察和随防[3].

　　Anti-TP (ELISA) 用纯化的基因重组梅毒螺旋体抗原包被的微孔板和酶标记抗原及其他试剂组成,应用双抗原夹心法原理检测人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体.文献[4]报道:双抗原夹心法ELISA 检测梅毒螺旋体敏感性高,结果可与 TPPA试验媲美,且假阳性和假阴性不易出现,故特异性也较好.而且由于机体不会产生太多的抗体,所以不会有"钩状效应"的出现,也不会因此而产生假阴性.此方法操作简便,一次可完成多份标本的检测,其试验结果由仪器分析,客观而准确,易于读取和保存.可以自动化、标准化、大批量同时检测,工作中对 ELISA 的室内质量控制也有更多的经验.因此,Anti-TP(ELISA) 法是目前梅毒筛选、早期诊断和确认的最好方法之一.但 Anti-TP(ELISA)法主要缺点为该法检测的是梅毒 IgM 和 IgG 的混合抗体,梅毒 IgG 抗体治愈后相当长时间内仍然存在较高的阳性率,甚至终身.因此,Anti-TP(ELISA)单独阳性只能说明正在感染或曾经感染过,不能判断梅毒疾病活动与否,或处于恢复期,因此不能作为疗效监测手段.

　　目前哨点监测检测梅毒采用 Anti-TP(ELISA)和 TRUST 的组合检测.其中,Anti-TP(ELISA) 具备良好的检测灵敏度和特异性,能够很好地了解性病门诊以及吸毒人群梅毒的感染现状,TRUST 又能了解筛查阳性的检测者是否是现症患者.同时Anti-TP (ELISA) 试剂盒单价只有同样人份的 TPPA试剂盒价格的一半,效果和 TPPA相近.因此,采用 Anti-TP (ELISA) 和 TRUST 的组合取代常用的TPPA 和 TRUST 的组合来进行梅毒哨点监测是一套既有良好的检测效果,又有一定经济效率的检测试剂组合.

　　参考文献

　　[1] 程艳杰, 王广杰, 王旭梅, 等. 梅毒螺旋体血清学检测方法的实验室评价[J]. 中国皮肤性病学杂志, 2005,19(8):503-504.

　　[2] Wang F, Cheng H. The detection technique to treponemapallidum in the laboratory[J]. The Chinese Journal ofDermatovenereology, 2003, 17(2):135.

　　[3] 潘兰. 四种梅毒血清检测方法比较分析[J]. 当代医学杂志, 2011, 17(28):8-10.

　　[4] 叶应抚, 王毓三, 申子喻. 全国临床检验操作规程[M].3版. 南京: 东南大学出版社, 2006:649-650.