溃疡性结肠炎运用白术芍药散的治疗机制(2)

　　白术以内酯类成分为主，细胞实验表明，白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ可通过剂量依赖性地抑制 LPS 诱导的腹膜巨噬细胞中 TNF-α 的释放和诱导型一氧化氮合酶（ iNOS） 的合成，发挥其抗炎作用，且白术内酯Ⅰ的作用更强[29].Bose等[30]为了模拟白术在体内的消化分解过程，将白术水提液滴加在含有地衣芽孢杆菌的培养基中进行发酵处理，结果发现发酵产物对 LPS 诱导的肠道上皮细胞损伤具有相当强的保护作用。白芍以单萜和单萜苷类为主，如芍药苷、氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷和芍药内酯苷等。白芍总苷提取物可通过抑制前列腺素 E2（ PGE2） 、白三烯 B4（ LTB4） 和一氧化氮（ NO） 的生成以及细胞内钙离子浓度的升高来发挥抗炎作用，还可通过抑制淋巴细胞的增殖，促进淋巴细胞凋亡，平衡辅助性 T 细胞（ Th） 和抑制性 T 细胞（ Ts） 的分化来抑制过度活化的免疫反应[31].陈皮主要含有黄酮类成分，橙皮苷、川陈皮素和橘皮素可以抑制 LPS 诱导的 NO,TNF-α，IL-1β 和IL-6 的产生，且具有明显的协同效应[32].防风主要含有色原酮和香豆素类，白芷灵是防风中含有的一种吡喃香豆素成分，研究发现其可以抑制 LPS 诱导的 RAW 264. 7 巨噬细胞中 NF-κB 信号通路的激活，展现出潜在的抗炎活性[33].
　　
　　3 白术芍药散治疗 UC 的机制研究。
　　
　　白术芍药散作为经典复方，其对 UC 患者的治疗是多角度和多靶点的。实验研究表明，该药通过多种机制发挥对UC 的治疗作用。
　　
　　3. 1 调节炎症细胞因子的水平 细胞因子是由免疫原、丝裂原或其他刺激剂诱导多种细胞产生的低相对分子质量可溶性蛋白质组成的。作为细胞间的信号传递因子，细胞因子参与了免疫细胞的分化发育，是一类重要的炎症介质。根据其在炎症反应中发挥的作用不同，可分为两大类，即促炎因子和抗炎因子。常见的促炎因子有 TNF-α，IL-1,IL-2,IL-8 和IL-17 等； 常见的抗炎因子有 IL-4,IL-5,IL-10,IL-13 和 TGF-β等。肠道炎症的产生和随后引发的一系列免疫反应，都与炎症细胞因子的分泌失调有着密不可分的关系[34].白术芍药散可通过纠正促炎因子和抗炎因子的失调来纠正肠道异常的免疫反应，从而发挥其治疗效果。
　　
　　范恒等[35]采用 2,4-二硝基氯苯（ DNCB） 免疫加醋酸局部灌肠法建立了 UC 大鼠模型，观察灌胃给予白术芍药散水煎液对大鼠结肠黏膜匀浆液中 IL-6,IL-8,IL-10 和 TNF-α 的影响，结果表明，给药 15 d 后，促炎因子（ IL-6,IL-8,TNF-α）指标均显着降低，抗炎因子（ IL-10） 指标显着升高。进一步研究发现，白术芍药散可通过降低结肠黏膜组织 TNF-α mR-NA 的表达，抑制炎症反应的进一步扩大[36].多位学者研究发现，白术芍药散方中单味药对 UC 模型大鼠也具有治疗作用。白术水煎液能改善 UC 模型大鼠稀便和血便的状况，显着降低血清中 IL-6 和 IL-17 的表达，升高 IL-10 的表达，纠正免疫功能的紊乱[37].王佐等[38]通过实验研究发现，白芍提取物可通过下调 IL-6,IL-17 和 IL-23 的水平，上调 TGF-β1 和转录因子 Foxp3 的表达，抑制 Th17 细胞分化，降低炎症反应和黏膜损伤。此外，有学者研究证明腹腔注射陈皮挥发油可显着降低 UC 大鼠血清中 TNF-α 及结肠上皮 CD4+和 CD8+细胞的含量，且与给药剂量呈正相关[39].
　　
　　3. 2 抑制 NF-κB 的结合活性 NF-κB 是一类具有多向调节作用的核转录因子，能与多种基因的启动子部位相结合，在机体的炎症、免疫和凋亡调控等方面发挥广泛和重要的作用。典型的 NF-κB 是以 p50 和 p65 组成的异源二聚体，也是其发挥活性的主要形式。在静息状态下，NF-κB 与其抑制性因子（ inhibitor of NF-κB,IκB） 结合，以无活性的状态存在于细胞浆内，当细胞受到外界刺激时，IκB 和 NF-κB 分离，NF-κB 被激活，进入细胞核并与靶基因上的启动子位点结合，启动基因转录，诱导产生相关的炎症因子[40].NF-κB 在 UC 患者中呈现过度激活的状态，导致细胞因子过度持续的释放，加剧了炎症反应。
　　
　　朱向东等[41]采用 2,4,6-三硝基苯磺酸（ TNBS） /乙醇溶液灌肠法诱导 UC 大鼠模型，采用白术芍药散的 70% 乙醇提取液合并挥发油干预治疗，治疗 21 d 后，大鼠结肠黏膜损伤情况改善明显，结肠黏膜 NF-κB p65 蛋白和基因表达显着降低，说明白术芍药散可能通过抑制 NF-κB p65 信号通路来发挥其在 UC 中的治疗作用。芍药内酯苷是白芍的主要成分之一，有学者研究表明，芍药内酯苷可以通过上调 Tollip（ Tollinteracting protein） 的表达来抑制 TLR4-MyD88-NF-κB p65 信号通路的传导，改善 UC 大鼠结肠的黏膜侵蚀、溃疡和炎性细胞浸润的状况[42].
　　
　　3. 3 抗氧化应激 氧化应激是指机体在遭受各种有害刺激时，体内高活性分子如活性氧自由基（ reactive oxygen species,ROS） 和活性氮自由基（ reactive nitrogen species,RNS） 产生过多，氧化程度超出了机体对氧化物的清除，氧化系统和抗氧化系统失衡，最终导致组织损伤。近年来有文献表明由氧化应激引起的氧化-抗氧化失衡在 UC 的发病过程中起着重要作用，UC 患者抗氧化能力降低，大量的氧自由基会与脂质发生过氧化反应，产生丙二醛（ MDA） 等脂质过氧化物，造成蛋白质和 DNA 的损伤，加重肠道炎症反应[43].
　　
　　有研究表明，白术芍药散能显着降低 UC 大鼠结肠组织髓过氧化物酶（ MPO） 和丙二醛（ MDA） 的含量，显着增加超氧化物歧化酶（ SOD） 的活性，证明该方能够清除细胞中的氧自由基，提升机体的总抗氧化能力[44].橙皮苷是陈皮中的主要成分之一，灌胃给予橙皮苷能够抑制 UC 大鼠结肠 MPO的活性，上调结肠谷胱甘肽（ GSH） 水平，减少结肠溃疡和充血面积，提示橙皮苷可能是白术芍药散治疗 UC 的活性成分之一[45].一氧化氮是组织细胞内源性一氧化氮合酶（ NOS）催化 L-精氨酸所生成，NO 作为一种新型的炎症介质，同时也是一种自由基，可与超氧阴离子自由基（ O-·2） 反应，生成一种氧化性更强的自由基-过氧亚硝酸阴离子（ ONOO-） ,ONOO-很稳定，可以扩散到邻近的肠黏膜细胞，造成严重的损伤[46].郭军雄等[47]采用兔结肠黏膜蛋白和乙酸诱发大鼠UC,灌胃白术芍药散水提液 4 周后，肠黏膜 NO 含量和 NOS活性均明显下降，说明该方可通过抑制结肠组织 NO 的合成，减少脂质过氧化物的产生，减轻结肠黏膜的炎症反应。
　　
　　3. 4 降低细胞黏附分子的水平 细胞黏附分子（ cell adhe-sion molecules,CAM） 是一类位于细胞膜表面的多功能跨膜糖蛋白，以受体-配体结合的形式发挥作用。CAM 通过使细胞与细胞间或细胞与基质间发生黏附作用，参与细胞的识别、活化和信号传导，是免疫反应和炎症应答过程中重要的分子基础，活动期 UC 患者结肠黏膜多种 CAM 的表达增加，是参与疾病发展的重要因素之一[48].研究发现，UC 模型大鼠结肠组织中细胞间黏附分子-1（ ICAM-1） 、吞噬细胞膜糖蛋白（ CD44） 和 P-选择素（ CD62P） 的表达显着增加，白术芍药散能显着降低结肠组织 ICAM-1,CD44 和 CD62P 的表达，抑制炎性细胞的浸润，减轻结肠组织的损伤[49-50].
　　
　　3. 5 激活胞外信号调节激酶的信号通路 胞外信号调节激酶（ extracellular signal-regulated kinase,ERK） 是丝裂原活化蛋白激酶（ mitogen-activated protein kinase,MAPK） 家族中的一员，可以应答炎症介质和细菌产物等多种细胞外刺激，参与细胞的增殖、分化、凋亡以及癌变等多种生物学反应[51].ERK1 和 ERK2 在 UC 的发病过程中均有较高的表达，炎性组织与正常结肠黏膜组织相比差异显着，表明 ERK 信号通路与 UC 的发生关系密切[52].朱向东等[53]研究发现，UC 模型大鼠结肠组织中 ERK1 和 ERK2 基因的表达量均高于空白组，灌胃白术芍药散能进一步上调模型大鼠 ERK1 和 ERK2基因的表达，并减轻结肠组织的溃疡和粘连，提示白术芍药散可能促进了 ERK 信号途径对肠黏膜损伤的自我修复过程。曹燕飞[54]通过实验进一步发现，白术芍药散可以通过提高丝裂原活化蛋白激酶激酶（ MAP kinase kinase,MKK） 亚型 Mek1 和 Mek2 的表达，激活 ERK 的信号通路，发挥对 UC的治疗作用。
　　
　　3. 6 调控细胞凋亡过程 细胞凋亡是细胞接受环境中生理或病理性信号刺激后发生的一种主动的和受多基因严格控制的细胞程序性死亡方式。在 UC 的发病过程中存在炎性细胞凋亡减慢和结肠上皮细胞凋亡加速 2 种病理性凋亡倾向，这 2 种凋亡的同时存在共同导致了结肠上皮屏障功能的破坏和机体免疫功能的紊乱，促使 UC 的发生和发展[55].白术芍药散水提液通过下调促凋亡基因 Bax 和 Fas 的表达和上调抗凋亡基因 Bcl-2 的表达，降低 UC 大鼠结肠上皮细胞凋亡指数，从而逐渐修复结肠黏膜的屏障功能[56].