探讨不同煎煮方法对黄连阿胶汤治疗慢性咽炎的影响

　　黄连阿胶汤出自张仲景的《伤寒论》，由黄连、黄芩、芍药、阿胶、鸡子黄组成，主治“少阴病，得之二三日以上，心中烦，不得卧者”。目前，黄连阿胶汤临床上常用于神经精神系统疾患且多伴有阴虚火旺、心肾不交之失眠，出血性疾患，热性疾患包括慢性咽炎等症。目前尚未见黄连阿胶汤治疗慢性咽炎的相关药理研究以及不同煎煮方法对其作用的影响。本文采用甲状腺片和氨水联合制造阴虚型慢性咽炎大鼠模型，研究不同煎煮方法黄连阿胶汤样品对大鼠三碘甲状腺原氨酸（triiodothyronine，T3）、甲状腺素（thyroxine，T4）、肿瘤坏死因子（tumornecrosisfactor，TNF-α）和血管内皮生长因子（tascularendothelialgrowthfactor，VEGF）含量及对血流变学的影响，分析黄连阿胶汤治疗慢性咽炎的途径及机制，探讨不同煎煮方法对黄连阿胶汤治疗慢性咽炎作用的影响。
　　
　　材料
　　
　　1.动物
　　
　　清洁级健康雌性SD大鼠48只，鼠龄7周，体质量（200±20）g，由郑州大学医学院实验动物中心提供，合格证号：SCX（豫）2010-0002。
　　
　　2.药品
　　
　　黄连、黄芩、白芍（南京海源饮片公司，批号：L110523H、110217H、110508H）；阿胶（山东福胶集团东阿镇阿胶有限公司，批号：1009074）；鸡子黄（郑州市政四街思达超市，批号：S20120215）；甲状腺片（上海实业联合集团长城药业有限公司，批号：20110303）；清咽片（佛山德众药业有限公司，批号：12005)；乌拉坦（北京化工厂，批号：20010328）；大鼠VEGF、TNF-α、T3、T4ELISA检测试剂盒（R&B有限公司，批号分别为20120302A、20120302A、20120302A、20120302A）。
　　
　　3.仪器
　　
　　BS210S型万分之一电子天平（北京SARTORIUS有限公司，max210g，d0.1mg）；DHL-A（3+1）型北京东华原十功能煎药机（北京东华原医疗设备有限公司）；BMG型多功能酶标仪（德国）；LBY-N6K自清洗快测血流变仪（北京普利生仪器有限公司）。
　　
　　方法
　　
　　1.试药的制备
　　
　　传统煎煮黄连阿胶汤制备：取处方量黄连12g，黄芩6g，白芍6g，加水15倍量，浸泡30min后，文火煎煮30min，二煎加水13倍量，煎煮20min，分别过滤，合并2次水煎液，浓缩至每毫升含生药0.5g，在不低于60℃的温度条件向合煎液中加入阿胶粗粉9g搅拌烊化；待温度降至50℃以下，加入鸡子黄2枚，搅拌即得。
　　
　　机械常压煎煮黄连阿胶汤的制备：取5倍处方量黄连60g、黄芩30g、白芍30g，加水18倍量，浸泡30min后，文火煎煮40min，二煎加水16倍量，煎煮40min，分别过滤，合并2次水煎液，量取体积得1870mL，取出374mL浓缩至每毫升含生药0.5g，在不低于60℃的温度条件向合煎液中加入阿胶粗粉9g烊化；待温度降至50℃以下，加入鸡子黄2枚，搅拌即得。
　　
　　机械高压煎煮黄连阿胶汤的制备：取5倍处方量黄连60g，黄芩30g，白芍30g，加水12倍量，浸泡30min后，文火煎煮30min，二煎加水10倍量，煎煮30min，分别过滤，合并2次水煎液，量取体积得2000mL，取出400mL浓缩至每毫升含生药0.5g，在不低于60℃的温度条件向合煎液中加入阿胶粗粉9g搅拌烊化5min；待温度降至50℃以下，加入鸡子黄2枚，搅拌即得。
　　
　　阳性组样品的制备：取4片清咽片溶解于50mL蒸馏水中混匀即得。
　　
　　2.动物分组
　　
　　适应性饲养3d后，随即分为6组（每组8只），分别为：空白对照组、模型组、阳性对照清咽片组、黄连阿胶汤传统煎煮组、黄连阿胶汤机械常压组、黄连阿胶汤机械高压组（以下简称空白组、模型组、阳性组、传统煎煮组、机械常压组、机械高压组）。实验室温度20-26℃，相对湿度40%-60%。
　　
　　大鼠自由饮食饮水
　　
　　3.给药情况
　　
　　大鼠适应性饲养3d，从第4天起，除空白组外，其他组大鼠灌胃甲状腺片溶液（1.25mg/100g体质量），空白组大鼠灌等量0.9%氯化钠溶液连续14d，同时将浓度为2.5%的氨水装入达芬霖喉露喷雾器内，给需造模的大鼠喷咽，每天1次，每次喷3掀，连续喷15d。空白组动物用0.9%氯化钠溶液喷咽，操作方法与造模组相同。每天观察动物咽部的黏膜形态、色泽及分泌物情况等。第20天进行灌胃给药，各组动物药物灌胃剂量如下：空白组给予0.9%氯化钠溶液；阳性组给予清咽片混悬液0.3g/kg；传统煎煮组给予传统煎煮混悬液3g/kg；机械常压组给予机械常压混悬液3g/kg；机械高压组给予机械高压混悬液3g/kg，给药体积均为1mL/100g，给药时间1周。
　　
　　4.实验方法
　　
　　连续灌胃7d后，用20%乌拉坦0.5mL/100g麻醉各组大鼠，自腹主动脉取血，其中4mL以6000r/min离心10min，收集血清。采用酶联免疫双抗体法进行测定，具体步骤按试剂盒说明书进行。用酶标仪在450nm波长下测定各孔吸光度值（Ａ值），绘制标准曲线，依据标准曲线计算出各待测样本中TNF-α、VEGF、T3、T4的含量；另取4mL进行EDTA抗凝，用LBY-N6K自清洗快测血流变仪，测定全血黏度、血浆黏度、全血还原黏度、红细胞压积、红细胞刚性、红细胞聚集指数。
　　
　　5.统计学方法。
　　
　　数据以x-±s表示，采用SPSS19.0软件作统计分析，组间比较采用单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。
　　
　　结果1.T3、T4、TNF-α、VEGF测定结果　模型组各项指标较空白组明显升高（P<0.01）；阳性组及各给药组较模型组明显降低（P<0.01，P<0.05）；不同煎煮方法组之间各指标含量变化均不大，见表1。

　　
　　2.血流变学指标测定结果
　　
　　模型组各个血流变指标除红细胞压积外均较空白组有明显的升高（P<0.01）；同时阳性组及各给药组的血流变各项指标除血浆黏度和红细胞压积外其余均较模型组明显降低（P<0.01，P<0.05）；不同煎煮方法组之间血流变各项指标除红细胞压积外均没有明显的差异，见表2-表3。

　　
　　讨论  T3和T4升高是甲亢的重要诊断指标，甲状腺素造模可以模拟临床常见疾病甲状腺机能亢进,多属于阴虚证。TNF-α是炎性反应中很重要的损伤性细胞因子，炎性细胞所分泌的TNF-α能进一步损伤组织，放大炎性反应，故抑制TNF-α的合成、分泌，能有效地抑制局部炎性反应。VEGF可特异性作用于血管内皮细胞上的受体结合，可引起内皮细胞增殖、血管通透性提高等效应，可在炎症部位表皮修复过程中发挥促进血管生成的作用，加速炎症部位的愈合。也就是说在炎症形成过程中会分泌较多的VEGF。慢性咽炎的咽部存在慢性充血、血管曲张、咽后壁淋巴滤泡增生、咽侧索肥厚等改变,均属中医“血瘀”的范畴。一般血瘀证多有血液流变学方面的改变。正常情况下,红细胞在流动中处于分散状态，出现一定的原因之后红细胞会产生聚集，就产生了全血黏度比、血浆黏度比等的增高,血液呈“高黏状态”。也就是常说的血液的黏、凝、聚改变。出现慢性咽炎则血液出现明显的黏、凝、聚。用药后，该状态有所减轻。黄连阿胶汤临床上常用于神经精神系统疾患且多伴有阴虚火旺、心肾不交之失眠，出血性疾患，热性疾患包括慢性咽炎等症。目前尚未见黄连阿胶汤对于慢性咽炎的相关药理研究。故文章选取与阴虚型慢性咽炎密切相关的T3、T4、TNF-α、VEGF及血流变学指标，分析黄连阿胶汤不同煎煮方法对阴虚型慢性咽炎的影响，探讨黄连阿胶汤在治疗慢性咽炎的机理和途径。
　　
　　模型组T3、T4较空白组明显升高可知阴虚造模成功。同时发现大鼠搔抓口部，频饮水而量不多，口腔分泌物增多，咽局部微肿胀，模型组大鼠较为明显以及阳性组TNF-α、VEGF较模型组均具有显著性下降，提示慢性咽炎造模成功。
　　
　　传统煎煮组、机械常压组、机械高压组与模型组相比有显著性差异说明黄连阿胶汤对慢性咽炎大鼠具有一定的作用，其作用机制可能与改善TNF-α、VEGF、血流变学指标有关。但各给药组之间均没有明显的差异，提示本文采取的3种煎煮方法制备的黄连阿胶汤对阴虚型慢性咽炎小鼠的作用影响不大。
　　
　　参考文献
　　[1]赵唯含,杜金行.心肾不交理论在中医现代临床中的应用.中华中医药杂志,2012,27(10):2621-2623
　　[2]朱志伟,贺琲珺.黄连阿胶汤临床应用近况.国医论坛,2003,18(6):48
　　[3]南淑玲,谢丹,章建,等.养阴清肺汤对慢性咽炎大鼠病理形态学及血液流变学实验观察.吉林中医药,2010,30(9):813-815