赤眼蜂(Trichogramma ssp. ) 被广泛用于防治稻纵卷叶螟、玉米螟、松毛虫等农林害虫,在常年放蜂的地区,寄生率保持在 70% ~ 80%,农药使用总量减少50% ~80%,大大减少了农作物和土壤中的农药残留量,环境质量明显改善.到目前为止,很多学者对赤眼蜂的生物学特性、种群繁育、应用及农药对赤眼蜂的药害与毒性等方面做了大量研究工作,但对赤眼蜂本身对农药的抵抗能力方面的研究报道较少。为此,作者以松毛虫赤眼蜂为对象,对其在不同温度条件下的谷胱甘肽硫转移酶(GSTs)活性进行了测定,旨在掌握不同温度条件下赤眼蜂对农药的抵抗能力,并为赤眼蜂的应用提供基础数据。
1 、材料及方法
1. 1 材料
1. 1. 1 供试昆虫松毛虫赤眼蜂(采自黑龙江省牡丹江市郊区) ,在 25℃ ± 1℃、75% RH、16L8D 组合条件下,繁育保种 3 代以上。将新羽化的松毛虫赤眼蜂成虫在 15℃、25℃、35℃3 个温度梯度下分别处理 6 h.
1. 1. 2 供试寄住取自本实验室用麦麸 + 大豆粉饲养的米蛾实验种群。每日收集当日新产的米蛾卵,经30 w紫外灯、在 40 cm 处照射 40 min 杀死胚胎,置于 4℃下保存,4 d 内使用。
1. 1. 3 药品0. 2 M 磷酸缓冲液(pH 7. 0) .
A 液 : 0. 2 M Na2HP04溶 液: 称 量Na2HP04·12H2O 35. 8 g,溶于蒸馏水中,定容至500 ml.
B 液 : 0. 2 M NaH2P04溶 液: 称 量NaH2PO4·2H20 15. 6 g,溶于蒸馏水中,定容至500 ml,将 A 液和 B 液按 61 39 (V / V) 混合,即成0. 2 M磷酸缓冲液。0. 04 M 磷酸缓冲液(pH7. 0)量取 100 ml0. 2 M 磷酸缓冲液(pH7. 0) ,加入 400 ml 蒸馏水即成。
1. 2 方法
1取适量松毛虫赤眼蜂成蜂,置于 1 ml0. 04 M磷酸缓冲液中,在冰浴下匀浆,10 800 r·min- 1离心 20 min,取上清作为酶源。
1. 2. 2 谷胱甘肽硫转移酶活性测定方法采用谷胱甘肽硫转移酶测定试剂盒(南京建成) 对谷胱甘肽硫转移酶比活力进行测定,试剂盒有关试剂填加及操作见表 1.
1. 2. 3 谷胱甘肽硫转移酶比活力计算根据测定数据,按照下列公式计算谷胱甘肽硫转移酶比活力。
谷胱甘肽硫转移酶比活力 = (非酶管 OD- 酶管 OD) / (标准管 OD - 空白管 OD) × 标准管浓度(20 μmol·L- 1) × 反应稀释倍数/反应时间/(取样量·待测液中蛋白含量) .
2、 结果与分析
不同温度处理的松毛虫赤眼蜂谷胱甘肽硫转移酶比活力测定结果见表 2 ~ 表 5、图 1.
从表 2 ~ 表 5 中可以看出,不同温度处理的松毛虫赤眼蜂,其谷胱甘肽硫转移酶的比活力差异显着(P < 0. 05) ,其中: 在 15℃处理条件下,羧酸酯酶的比活力最低,为 6. 80 ±4. 71;35℃ 处理条件下最高,为 98. 22 ± 1. 76; 25℃ 处理介于两者之间,为 32. 49 ± 2. 60.从图 1 中可以看出,随着处理温度的升高,谷胱甘肽硫转移酶比活力显着上升。说明松毛虫赤眼蜂的抗药性与温度密切相关,随着温度的升高,抗药性明显下降。
3 、小结
以毛虫赤眼蜂为对象,对其不同温度条件下的谷胱甘肽硫转移酶比活力进行测定,结果表明: 在 15℃ 处理条件下,谷胱甘肽硫转移酶的比活力最低,为 6. 80 ± 4. 71; 35℃ 处理条件下最高,为 98. 22 ±1. 76; 25℃处理介于两者之间,为 32. 49 ±2. 60,3 种温度条件下的谷胱甘肽硫转移酶比活力存在显着差异(P <0. 05) ,且随着温度的升高谷胱甘肽硫转移酶比活力显着上升。说明松毛虫赤眼蜂的抗药性与温度密切相关,随着温度的升高,抗药性明显下降。
为解决温度升高导致的赤眼蜂抗药性下降问题,应将蜂卡挂在植株的阴面,或降低挂卡位置,以免阳光直射而提高温度; 亦可以提高单位面积的蜂卡数量,以弥补赤眼蜂抗药性降低带来的寄生量损失。
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