摘 要
犬中耳炎(Canine Otitis Media)是一种炎症性疾病，可导致耳道感染，严重时会影响患病犬的听力。由于不同地区犬中耳炎病原菌的分布不同，使临床用药缺乏针对性。因此，本实验调查石河子地区犬中耳炎病的发病情况，采集病犬的中耳分泌物进行病原菌分离、鉴定，对每株菌进行药物敏感性试验，以确定石河子地区犬中耳炎病原菌的种类及药物敏感性；同时对典型临床病例进行治疗，分析治疗结果，筛选治疗方案，为本地区犬中耳炎病的治疗提供科学依据。
方法：对石河子地区 4 个动物医院接诊的 96 例中耳炎患病犬进行发病情况调查，主要通过问诊和现场调查患病犬的年龄、患病时间、品种、性别和单双耳的发病情况等，统计数据并对其进行分析。无菌采集病犬中耳分泌物进行培养，分离，对培养的细菌进行病原学、生化鉴定及 PCR 鉴定，并对病原菌进行 14 种临床常用抗菌药物的敏感性测试，结合石河子地区犬中耳炎的病原菌种类和药敏试验结果对临床患犬中耳炎典型病例采用对因与对症的治疗方案，记录并观察治疗结果。
结果：石河子地区犬中耳炎的发病情况与患病犬的品种、年龄和时间都有一定的关系：多个年龄和品种的犬在一年四季都可以发生中耳炎，低于 3 岁的犬发病率较高，7 岁以上犬的发病率比较低。3~8 月份是犬中耳炎的高发病时间，12~2 月份的发病率较低；在品种上，长毛犬、趴耳犬及耳道狭窄的犬较其他品种的犬易发生中耳炎；犬中耳炎发病常表现为双耳同时发病，单侧耳道发生的情况偏少。此外，中耳炎的发生与性别无关。在该研究中共分离出 112 株病原菌。其中，金黄色葡萄球菌分离得到 48 株，占总的分离菌株数的 42.8%，其次是链球菌 32 株，占 28.6%，18 株假单胞菌占 16.1%，大肠杆菌 14 株占总分离菌株的 12.5%。革兰氏阳性病原菌主要对左氧氟沙星、庆大霉素和氟苯尼考等抗生素有较高的敏感性，阴性病原菌主要对头孢他啶、左氧氟沙星和庆大霉素等抗生素敏感。4 种菌都对青霉素和红霉素表现出极高的耐药性。在 10 例临床病例的治疗中，根据病因不同，采取了两组不同的治疗方法，其中 4 例经诊断为犬耳螨与细菌性中耳炎混合感染病例，使用组方（1）包括福来恩驱虫滴剂配合犬耳净（主要成分庆大霉素等）等药治疗；6 例经诊断为细菌性中耳炎病例，组方（2）使用的是氟苯尼考甲硝唑滴耳液，9 例患病犬都痊愈。
结论：本地区犬感染中耳炎的优势菌为金黄色葡萄球菌，根据药敏试验结果，分离的优势菌对氟苯尼考、林可霉素、庆大霉素等药物敏感。经典型病例治疗，使用犬耳净、氟苯尼考甲硝唑滴耳液等药物取得良好的疗效，试验结果为该病的临床治疗提供了依据。
关键词： 犬中耳炎；细菌；分离鉴定；药敏分析；临床治疗。
Abstract
Canine Otitis Media is an inflammatory disease that can lead to ear canal infection, and in severe cases it will affect the hearing of the Canine in question. Due to the different distribution of pathogenic bacteria in different areas, the clinical medication of canine otitis media is less targeted. Therefore, this experiment investigated the incidence of canine otitis media in shihezi area, collected the middle ear secretions of the sick dogs for pathogen isolation and identification, and conducted drug sensitivity test for each strain to determine the types and drug sensitivity of canine otitis media in shihezi area. At the same time, the typical clinical cases were treated, the treatment results were analyzed, and the treatment options were selected to provide a scientific basis for the treatment of canine otitis media in this region.
Methods: This experiment investigated into 96 cases of diseased dogs admitted to four animal hospitals in Shihezi area. The author did an inquiry into the age, duration, breed, gender of the dogs and whether they were contracted single ear or both ears, and made an analysis of the recorded data. The author collected middle ear secretions of diseased dogs in a germ-free environment, separated and cultivated the bacteria from the secretions, conducted etiological, biochemical and PCR identification of the bacteria, andcarried out sensitivity tests to pathogens using 14 kinds of commonly used clinical antimicrobial drugs.
With reference to the types of pathogens and sensitivity test results, this experiment put forward tailored treatment programs to the typical clinical cases of canine otitis media and recorded treatment outcomes.
Results: Canine otitis media in Shihezi area is related to the breed, age and time. Dogs of different ages and breeds can suffer from otitis media all year round, and the incidence of otitis media is higher in dogs under 3 years old and lower in dogs over 7 years old. The canine otitis media is more frequent from March to August, and less common from September to November and December to February. In terms of breed, long-haired dogs, planking dogs and dogs with narrow ear canal are more prone to otitis media thanother breeds. The incidence of canine otitis media is often manifested as the simultaneous onset of both ears, but the occurrence of unilateral ear canal is rare. In addition, the occurrence of otitis media has nothing to do with gender. A total of 112 pathogens were isolated in the study. Among them, 48 strains of staphylococcus aureus were isolated, accounting for 42.8% of the total isolates, followed by 32 strains of streptococcus pneumoniae (28.6%), 18 strains of pseudomonas aeruginosa (16.1%), and 14 strains ofescherichia coli (12.5%). Gram-positive pathogenic bacteria were mainly sensitive to antibiotics such as ampicillin levofloxacin gentamicin and fluorfenicol, while negative pathogenic bacteria were mainly sensitive to ceftazidine, cefotaxime, levofloxacin and gentamicin, and all the four strains were highly resistant to penicillin and erythromycin. In the treatment of ten clinical cases, two different treatment methods were adopted according to different causes. Four cases were diagnosed as mixed infection of canine ear mite and bacterial otitis media, and were treated with the first prescription using Frontline Insect Repellent Drops. Six cases were diagnosed as bacterial otitis media and treated with the second prescription using Florfenicol and Metronidazole Ear Drops. Nine of the total 10 cases recovered.
Conclusion: Staphylococcus aureus is the dominant bacterium of canine otitis media in this area. According to the sensitivity test results, the advantage of the separation of bacteria for fluorobenzene nicol, clindamycin gentamicin drug sensitivity by the typical cases of treatment, such as using dog ears net fluorobenzene nicol, metronidazole ear drops drugs such as satisfactory curative effect, experimental results provide the basis for the clinical treatment of the disease.
Key words: Canine otitis media; Bacteria; Isolation and identification; Drug sensitivity analysis; Clinical treatment.
第一章 文献综述
1 犬中耳炎的临床概况。
1.1 犬中耳炎的概念。
犬中耳炎是指病原菌侵入犬鼓室和咽鼓管，并在其中大量增殖引起的炎症反应[1-2]，主要是由耳道或咽鼓管感染扩散引起的犬的常见耳道疾病，在犬的全身抵抗力较低时表现出来[3]。研究表明，区域和气候的不同是导致各区域犬中耳炎病原菌及药敏性结果不尽相同的主要原因[4]。对石河子地区多家动物医院犬细菌性中耳炎发病情况的统计表明，犬中耳炎的发病率约占全部临床病例的 6.74%，而据报道全国犬只的犬细菌性中耳炎的发病率为 3.86%，有较高的发病率。该疾病通常呈短期的急性发作，只有少数的病犬由于病势太过严重或者治疗不当未能痊愈[5]，致使耳道增生粘连，接听声音的能力受到影响，严重的则会引起耳道堵塞甚至形成胆脂瘤，从而会不同程度的增加耳道的炎症并影响患病犬的听力[6]。结果，可能发生耳聋和平衡障碍，并且头部和颈部可能倾斜到地面。在极少数情况下，发展成死亡[7]。
1.2 犬中耳炎的病因。
中耳炎是一种中耳感染。发生犬中耳炎最常见的原因是：（1）外耳炎的延伸使细菌进入中耳引发中耳炎如病原菌的入侵、过敏反应、寄生虫、自身免疫或免疫介导的疾病等[8]；（2）细菌通过咽鼓管扩散到中耳，一般是指上呼吸道感染[9]，如感冒、传染性鼻炎和化脓性结膜炎等，产生的炎症会扩散到咽鼓管，然后咽鼓管扩散到中耳引起中耳炎。
犬中耳炎最常见的原因是细菌从外耳迁移到中耳。此外，外耳炎和鼓膜穿孔均可以引起中耳炎[10]，发生慢性外耳炎的病例，外耳的长期湿气会造成浸渍，最终击穿鼓膜，然后感染从耳道传播到耳大疱。如果外耳感染大部分被清除，那么鼓膜就会愈合。如果不能解决主要因素耳疾则可能复发。此外，中耳炎的诱发因素虽然不会引起耳疾，但它们增加了中耳炎的发展风险，增加了治疗的难度，如解剖因素（矮脚猎犬下垂的长耳朵）、耳朵里的水分过多以及医源性创伤等都为中耳炎的发病提供了条件[11]。按照病因学，可将发病原因分为三类：原发病因、诱发病因和促发病因。（1）原发病因：内源性和外源性因素可直接引起犬中耳炎的炎症和瘙痒，外源性因素一般比较容易确认，及时去除后常可恢复。但许多病例可能是终生的代谢障碍，这种病例很难治疗。原发病因主要包括：
寄生虫、异物和自身免疫病等。（2）诱发因素：耳部微气候的改变可使其正常分泌功能和微生物区系的平衡失调，导致条件性感染。导致失调的原因有形态异常、耳道浸湿、治疗不当、损伤耳道的疾病、发烧、全身性疾病。（3）促发因素：原发因素和诱发因素使耳道的微环境改变后可发生条件性感染和病理变化，使本病难于康复。这些因素有细菌、酵母菌、外耳炎和渐进性病理变化。
1.3 犬中耳炎的病原。
研究表明，犬中耳炎在不同的地域和气候等条件下，病原菌的种类也不尽相同。根据不同地区的相关资料，昆明地区犬中耳炎的病原菌主要为金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌[12]；湖北地区犬中耳炎的主要病原菌是金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌[13]；南京地区的主要病原菌除了金黄色葡萄球菌外还有表皮葡萄球菌和布兰汉氏球菌等[14]；山东报道的犬细菌性中耳炎的主要病原体是酵母、金黄色葡萄球菌和假单胞菌[15]。临床上犬中耳炎的发生大多是细菌和真菌混合，其中，真菌通常先行感染。根据相关研究资料表明，从中耳分离到的细菌产内酰胺酶的菌株正在增加，对青霉素耐药的链球菌的数量也在随着年份增加[16]。以下为中耳炎中几种常见细菌的形态、培养特性及致病性，主要是金黄色葡萄球菌[17-18]、链球菌[19-20]、假单胞杆菌[21-22]和大肠杆菌[23-25]：
1.4 发病机制。
中耳炎是指中耳全部或部分结构的炎症性病变，目前报道的该病的发病机制主要有三种[26-28]：（1）外耳感染途径 当外耳发生外耳炎或有异物侵入时，对鼓膜造成影响，引起中耳发炎。病原体主要有葡萄球菌，假单胞菌等。（2）咽鼓管途径 上呼吸道感染如流行性感冒，传染性鼻炎和化脓性结膜炎等，将会将炎症扩散到咽鼓管，从咽鼓管蔓延到中耳，引发中耳炎。（3）血源性感染 当动物出现败血症时，病原菌随着血液循环流经中耳引发中耳炎，这种情况一般很少发生。
1.5 犬中耳炎的症状。
犬中耳炎症状差异很大。中耳感染的迹象主要表现为：疼痛，患病犬避免被抚摸，不愿意咀嚼，耳廓耷拉，摇动头部，耳部发烫等[29]。当发生单侧中耳炎时，动物倾斜的头偏向患侧，患侧的耳朵下垂；当患病犬双耳都发生中耳炎时，动物头颈长伸，经常用鼻头触地，甩耳或者由于耳朵瘙痒而抓挠耳朵。此外，中耳炎往往伴随着炎症的增加，，严重可能会出现复发性或阵发性的抽搐。当炎症逐渐扩散到内耳时，病犬会出现耳聋，耳平衡失调，头颈部倾斜，转圈，跌倒到地面，有时还会出现面神经麻痹等症状[30]。
病犬的主要症状是烦躁、摇头、耳痛，严重病例可能出现运动障碍和听力丧失的症状，甚至引起耳道增生、钙化和肿瘤等。根据临床症状和检查可见耳病理期变化不同，可分为以下几个时期：
早期(卡他型)，多表现在鼓室粘膜和鼓室有轻微的红肿，血管舒张，腺体分泌增加导致分泌产生浆液性渗出物。此时期的患病犬可能会有轻微的耳痛反应和听力损失现象，通常没有明显的全身症状，这个时期不容易被发现。
中期(即化脓期)，炎症反应继续发展，鼓膜粘膜红肿的情况逐渐恶化。渗出物从粘液转变为化脓性或化脓性渗出物。病犬的症状也很明显。单侧发病的患病犬，头部偏向患侧或者头部转向患病侧。头部或耳朵会有刮伤，摸耳朵时有明显的疼痛反应，严重者会划伤耳廓毛细血管，引起耳血肿。在此期间，病犬可能会出现显着的全身反应，如体温升高、精神不振、食欲不佳等。严重的病犬在这个时期将会共济失调，甚至眼球震颤。偶尔，有些犬会表现出消化道症状。
晚期(穿孔型)，患病犬中耳鼓室分泌物增多，无法排出，局部鼓膜会发生坏死性破溃或穿孔，导致脓液外泄。临床病例可见患病犬耳道内流出恶臭的分泌物，由于分泌物能够流出，会使炎症反应减轻。
恢复期，经过对病犬的积极治疗后，患病犬的耳道逐渐恢复正常，脓性分泌物减少，鼓膜穿孔也可逐渐修复。在临床中可以看到患病犬耳道内出现干燥的分泌物。
【由于本篇文章为硕士论文，如需全文请点击底部下载全文链接】
1.6 犬中耳炎的诊断
1.7 犬中耳炎的治疗
2 本研究拟采取的技术路线及目的意义
2.1 发病情况调查
2.2 病原菌的分离及鉴定
2.3 病原菌的药敏性分析
2.4 犬中耳炎的临床治疗
2.5 目的及意义
第二章 试验研究
试验一 犬中耳炎发病情况调查
1 材料和方法
1.1 材料来源
1.2 调查方法
1.3 统计学方法
2 结果
2.1 不同年龄犬中耳炎的患病情况
2.2 不同月份犬中耳炎的患病情况
2.3 不同品种犬中耳炎的患病情况
2.4 单/双侧耳犬中耳炎的患病情况
2.5 不同性别犬中耳炎的患病情况
3 讨论
3.1 犬中耳炎发病与年龄的相关性
3.2 犬中耳炎发病与季节的相关性
3.3 犬中耳炎的发病与品种的相关性
3.4 犬中耳炎多为双耳发病
3.5 犬中耳炎发病与性别无关
试验二 犬中耳炎病原菌的分离鉴定
1 材料
1.1 材料来源
1.2 主要药品及试剂
1.3 主要设备
1.4 分离用培养基
1.5 生化鉴定
1.6 四种菌的 16Sr DNA 引物序列
2 方法
2.1 病料的采集
2.2 细菌的分离培养
2.3 细菌的形态学观察
2.4 生化鉴定
2.5 PCR 扩增
3 结果
3.1 病原菌初步鉴定结果
3.2 菌株生化鉴定结果
3.3 菌液 PCR 扩增结果
4 讨论
试验三 犬中耳炎病原菌的药敏性研究
1 材料
1.1 菌株来源
1.2 培养基
1.3 药敏纸片
1.4 试验器材
2 试验方法和判定标准.
2.1 药物敏感性试验
2.2 判断标准
3 结果
3.1 金黄色葡萄球菌耐药性试验结果
3.2 链球菌耐药性试验结果
3.3 假单胞杆菌耐药性试验结果
3.4 大肠杆菌耐药性试验结果
3.5 耐药性比较
4 讨论
试验四 犬中耳炎临床病例的对比治疗试验
1 材料
1.1 病例来源
1.2 主要仪器设备与药品
2 方法
2.1 诊断方法
2.2 治疗方法
3 结果
3.1 诊断结果
3.2 治疗结果
3.3 预防
4 讨论
全文结论
（1）对新疆石河子市四家动物医院发生的 96 例中耳炎患病犬进行了发病情况调查，发现石河子市犬中耳炎的发生与年龄、品种、季节等都有一定关系。任何年龄和品种的犬都可以发生中耳炎，但 3 岁以内的犬发生中耳炎的数量最多，且长毛犬、趴耳犬及耳道狭窄品种犬的发生率更高。春夏季节由于动物换毛、天气炎热等原因，患病的犬较多，且中耳炎发病时大多为双耳发病，这与中耳炎的传染性有一定关系。
（2）对从石河子市四家动物医院采集的 96 例中耳炎的病料进行了细菌分离和生化鉴定及分子生物学鉴定。鉴定结果为：48 株金黄色葡萄球菌、32 株链球菌、18 株假单胞杆菌、14 株大肠杆菌。
（3）对分离出来的四种病原菌选择了临床上常见的 14 种抗生素进行药物敏感性试验，发现从犬中耳炎分离到的革兰氏阳性病原菌主要对氨苄西林、左氧氟沙星、庆大霉素等抗生素有较高的敏感性，阴性病原菌主要对头孢他啶、头孢噻肟、左氧氟沙星等抗生素敏感。
（4）本研究对临床上 10 例病例进行跟踪治疗调查，根据发病原因不同分为两组治疗方法。对于 4 例诊断为细菌性中耳炎与耳螨混合感染的病例，选用组方（1），包括福来恩驱虫滴剂配合犬耳净（主要成分庆大霉素等）等药治疗，4 例病犬均收到了较好的治疗效果，治愈率为 100%。对于 6 例诊断为细菌性中耳炎的患病犬，使用组方（2），药物是氟苯尼考甲硝唑滴耳液，5 例犬治疗效果较好，治愈率为 83.33%。
参考文献
