围绝经期综合征过往有"更年期综合征"之称,研究发现该病的产生与中枢的神经递质紊乱关系密切[1-2].西医治疗一般将雌激素替代疗法( hHRT)作为首选方法来延缓卵巢衰老,进而达到防治围绝经期综合征的目的[3].但近年来关于替代疗法多种副作用的报道越来越多[4-6],人们开始寻求安全有效的治疗方法.针灸作为传统中医疗法,在治疗围绝经期综合征方面,疗效显着,副作用小[7],逐渐在国际上备受重视,尤其是针刺三阴交具有确切的临床疗效[8-9].本实验选取自然围绝经期大鼠模型作为研究的对象,通过电针疗法探讨雌激素与单胺类神经递质在针刺治疗围绝经期综合征中作用规律.
1 材料与方法
1. 1 实验动物 清洁级 3 月龄 Sprague-Dawley( SD) 大鼠 8 只,体质量( 220 ±20) g; 清洁级 11 ~15月龄 SD 大鼠 32 只,体质量( 320 ±20) g.皆购于北京维通利华动物中心[SCXK( 京) 2012-0001].动物置于清洁柜,实验室内温度保持( 20 ±2) ℃,湿度是 65%,并且 12 h 光暗周期,自由摄食与饮水.
1. 2 自然围绝经期大鼠模型的建立 据文献方法[10],11 ~15 月龄雌性 SD 大鼠性激素水平、子宫、等机体病理生理与妇女围绝经期相似,提示已进入围绝经期.故我们选择 11 ~ 15 月龄雌性 SD 大鼠为本实验的动物模型.本课题前期利用该模型通过阴道涂片法[11]即每日定时用碱性美蓝溶液给 11 ~15 月龄 SD 雌性大鼠的阴道涂片染色,并观察其在显微镜下组织学的变化,连续观察 3 个动情周期即15 日,根据细胞形态、种类和数量来进行筛选,镜下观察大鼠阴道涂片没有成熟的脱落细胞,结果该模型符合围绝经期变化规律.
1. 3 动物分组与治疗 从 32 只 11 ~ 15 月龄大鼠中筛选阴道脱落细胞涂片结果围绝经期特征符合者16 只,根据随机数字表法分为: 模型对照组 ( 模型组) 8 只和电针治疗组( 治疗组) 8 只.另将 3 月龄大鼠 8 只作为青年对照组( 正常组) ,共 3 组.在处理后第 31 天的上午,统一取材,取材前 12 h 禁食.
正常组和模型组大鼠不给予任何治疗.治疗组大鼠给予电针三阴交治疗.根据林文注主编的《实验针灸学》教材,定位三阴交位于后肢内踝尖直上 10mm.直刺 3 mm,进行电针刺激,采用疏密波,频率2 /100 Hz,强度以针柄轻微抖动为宜,每次留针 20min.隔日 1 次,共计 15 次.
1. 4 雌二醇、5-HT、NE、DA 含量测定 雌二醇酶免试剂盒: 武汉华美公司.五羟色胺( 5-HT) 、去甲肾上腺素( NE) 、多巴胺( DA) 的标准品均为 Sigma 公司产品,甲醇( 色谱纯,Fisher Scientific) ,二正丁胺( BAS进口分装,上海化学试剂) ,B8 离子对试剂( 天津化学试剂二厂) ,高氯酸( HCLO4,国产分析纯) ,乙酸钠、柠檬酸、乙二胺四乙酸钠( 国产分析纯) .
1. 5 统计学处理 采用 SPSS17. 0 的软件进行统计分析,两组以上计量资料进行单因素方差分析.
2 结果
2. 1 电针三阴交对自然围绝经期大鼠卵巢中 E2的含量的调节 与正常组 [( 162. 40 ± 49. 90)pmol / L]比较,模型组卵巢 E2 的含量明显降低了59. 17% [( 66. 30 ± 21. 19) pmol / L,P < 0. 01],与模型组 比 较,治 疗 组 的 卵 巢 E2 含 量 [( 109. 72± 47. 39) pmol / L]显着增高了 65. 49% ( P < 0. 01) ,但仍未恢复至正常水平( P <0. 01) .
2. 2 电针三阴交对自然围绝经期大鼠海马 5-HT、NE、DA 的含量及 5-HT / NE 的影响 与正常组比较,模型组的 5-HT 含量升高了 34. 35%,NE、DA 分别下降了 33. 86% 和 34. 38% ( P < 0. 01) .与模型组比较,治疗组大鼠 5-HT 含量明显降低了 11. 13%( P <0. 05) ,NE 显着上调了 19. 18% ( P <0. 05) ,差异有 统 计 学 意 义.治 疗 组 DA 含 量 虽 升 高 了7. 59% ,但无统计学意义( P > 0. 05) .与正常组比较,模 型 组 的 5-HT/NE 的 比 值 显 着 升 高 ( P< 0. 01) .与模型组比较,治疗组的 5-HT / NE 的比值显着降低了 23. 47%( P <0. 01) ,见表 1.
3 讨论
围绝经期综合征中医称为"绝经前后诸症"范畴,历代文献关于本病的论述散见于"脏躁""心悸""失眠""眩晕""头痛""郁证"等病症中[12].其病机主要为肾气虚,天癸竭,冲任脉虚,脏腑气血功能失调.三阴交是足太阴脾经经穴,又是足太阴、足厥阴、足少阴三条经脉的交会穴,具有补脾胃,助运化,化浊利湿,通经活络,调和气血,滋补肝肾之功效,且妇女的生理特点与肝脾肾三脏关系密切,因此三阴交穴在治疗妇科病症方面有着独特的优势,常作为妇科疾病的首选穴位.
围绝经期综合征的主要表现以植物神经功能紊乱为主.绝经后雌激素的水平下降,会影响脑部大脑皮层和下丘脑的神经活动,进而导致中枢神经系统的神经递质诸如 NE、DA、5-HT 以及阿片肽等的活性下降[13].中枢神经递质的释放,在正常情况下,应保持在一定的水平,而且递质间的比例需相互协调以维持功能的稳定.我们发现模型组大鼠海马中 NE 和 DA 较正常组明显下降( P < 0. 01) ,5-HT的含量异常升高,进而使 5-HT/NE 的比值上升,破坏了的正常生理环境,最终导致出现潮热、盗汗、抑郁、焦虑等临床症状.本实验通过电针三阴交穴可提高模型组大鼠海马中下降的 NE 含量,降低异常升高的 5-HT 水平( P < 0. 05) ,从而使 5-HT/NE 的比值向正常值接近.说明电针三阴交穴可以有效纠正围绝经期大鼠中枢单胺类神经递质紊乱的作用,进而缓解围绝经期综合征的临床症状.
同时,本实验结果显示,模型组的 E2 水平明显低于正常组,说明自然围绝经期模型大鼠卵巢中雌激素水平明显降低,比较符合相关文献所报道的围绝经期大鼠模型的性激素水平.而作为主要由卵巢和肾上腺分泌的雌激素 E2,它的缺乏是围绝经期综合征发病的重要原因.针对出现的一系列症状,雌激素治疗有效[14].在本实验中,治疗组与模型组相比,E2 水平明显高于模型组( P < 0. 01) ,说明电针三阴交可以升高 E2 含量,提示针刺对雌激素指标有一定的作用.
可见,本实验针刺对大鼠神经递质及内分泌的改变均离不开神经-内分泌-免疫网络( NIM 网络) 的整体性调节.经前期综合征( PMS) 的发生发展与NIM 网络的平衡紊乱密切相关,NIM 网络理论指出,神经、内分泌、免疫系统无论在结构上还是在功能上都有着密切的联系.它们之间存在着一个多维立体网络,由多种神经递质、细胞因子与激素等相互作用与调节[15],本实验中由于雌激素也发生了有益的变化,提示可能是这些神经递质的变化改变了NIM 网络的失衡状态,引起了激素的变化,进而共同作用改善了围绝经期综合征的相关症状,具体的机制尚待进一步证实.
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