生物化学检验方法与影响因素

　　生物化学检验是研究健康和疾病状态下人体内的生物化学过程及指标测定方法的一门科学。生化检验是医学诊断学的一个重要分支，属于生物科学范畴。生化检验充分利用化学、物理性、生物学、数学、病理学、生物化学、分子生物学和遗传学等学科的知识，光谱学、应用电子学、分析化学、辐射学、仪器学等开发的方法、技术和仪器，重点研究疾病状态下人体的生物化学变化，建立有效方法来检测人体内的化学物质及其代谢产物的变化，为评估健康、诊断与防御疾病提供信息。

　　1生物化学检验发展现状

　　20世纪中后期，随着临床医学、分析化学和生物化学等科技的发展和相互融合，加上自动化与计算机技术的不断发展，使临床生物化学理论研究得到了不断的发展，并提升了其检验技术，如，免疫学、仪器分析和分子生物学等。进入21世纪后，分子生物学不断发展，核酸分子杂交技术也得到了广泛应用，临床生化实验室内引进了各种印迹技术，进一步提高了检验技术的发展[1].随着计算机信息技术、自动化分析技术等领域地发，使临床生化诊断方法有了更先进的技术。现如今，临床生化检验的发展也从横向转为纵向深入，研究技术更加发展。

　　2生物化学检验方法

　　随着现代医学科技的不断发展，临床生物化学检验也有了长足的进步，新技术和新方法越来越多，并日渐成熟，在临床工作中起到不可替代的作用。

　　2.1电泳技术

　　电泳是指带电粒子在电场中向着与其所带电荷相反的电极移动的现象。电泳技术是利用电泳方法对混合物进行分离、纯化、检测的一门技术，主要用于蛋白质、核酸等生物大分子的分离分析。电泳技术一般可分为区带电泳、自由界面电泳和显微电泳三大类型。区带电泳[2]是待测物质在一惰性支持物上进行电泳，电泳后样本的不同组分形成带状的区间，区带电泳设备简单、分辨率较好、操作方便，已广泛应用于医学检验中。

　　2.2电化学分析技术

　　电化学分析技术是在电化学基本原理及实验技术基础上，通过物质自身的电化学性对物质的组成、含量进行测定的一种方法，具有精确度高、灵敏度高、选择性强、仪器操作简单等优点。目前临床上应用的主要是离子选择电位分析法，其原理是利用电极电位及溶液内活性物质之间的关系进行分析，具有选择性较好、操作简单、分析速度较快的优点。

　　2.3层析技术

　　层析技术是利用物质间理化性质差异建立起来的分离分析方法。层析系统一般由流动相和固定相组成，当待分离样品随流动相流经固定相时，因为待测组分间理化性质差异，在固定相和流动相间发生相互作用（包括解吸附、吸附、结合、亲和作用等）的能力不同，因此分布出现差异。随着流动相的不断流动，待测样品在两相中的含量差异被逐步放大，最终，与固定相结合较弱的组分随流动相移动较快，先流出层析柱；反之，与固定相结合较强的，后流出层析柱。

　　分步收集各时间段的流出液，即可分离样品，并通过层析系统的检测器或使用其他分析仪对目标组分进行定性、定量分析。按照层析技术的分离技术可分为：吸附层析、分配层析、离子交换层析、凝胶层析、亲和层析等；按两相状态，可分为气相层析和液相层析。

　　2.4自动生化分析技术

　　自动生化分析仪是自动生化分析技术的载体，它将传统生化分析过程中的部分或全部操作实现了自动化，并已逐渐进入其他领域如微生物学、分子病理学、病理等。Konstantinos Makris[3]等通过使用自动生化分析仪，在乳胶颗粒增强比浊法（PETIA）基础上测量半胱氨酸蛋白酶抑制物C（uCysC），表明uCys水平可能预测肾小管功能紊乱及其他肾脏疾病。自动生化分析技术相比与传统手工方法有许多优点：减少误差，提高精密度与准确度；可同时进行多种分析方法的检测；提高工作效率，节约人工成本，缩短检验周期；为微量化检测创造条件。

　　2.5酶学分析技术

　　酶是由活细胞产生的能高效催化特异生化反应的蛋白质，属于生物催化剂。随着酶学分析、免疫学分析、同工酶及其亚型分析等技术的应用，以及测定技术的自动化与固定化等，使酶学分析技术迅速发展；现代酶制剂经常用于糖尿病、半胱氨酸尿病、心脑血管等疾病的测定。RitaParoni[4]等通过检测上百例不同糖尿病、肝硬化等疾病的患者，对改进版LucicaGA-L法进行评估，证明了LucicaGA-L酶法是一种能够有效对糖尿病及胰岛素抵抗进行血糖测定的方法。酶学测定包括相对定量法和绝对定量法。绝对定量法即将酶作为一种蛋白质来对其进行定量的测定方法；相对定量法即将酶作为一种催化剂来测定其催化反应速率即酶活性来定量的测定方法；临床上基本选用相对定量法。

　　2.6分子生物学技术

　　DNA双螺旋结构模型的建立、中心法则的提出，开辟了分子生物学这门新学科。

　　重组DNA、核酸分子杂交和体外DNA扩增等技术的发明，极大地推动了分子生物学技术的发展。PCR、核酸杂交、限制性酶切分析和DNA测序等已成为医学生化检验的主要技术之一，而基因芯片、变性高效液相色谱分析和毛细管电泳等技术也延伸至生化检验领域[5].随着技术的发展，使分子生物学检验技术从传统的DNA检测，发展为更全面的核酸、蛋白质检测；应用范围也从单一诊断遗传性疾病，发展到广泛应用于感染性疾病、肿瘤等多个医学领域[6].XingyiMa[7]等设计了一种单一纳米等离子传感器来识别突变基因，甚至可以从10海拉细胞中检测到端粒酶。与传统检验方法相比，该技术最大的优点在于不仅能对疾病作出早期准确的诊断，还能确定个体对疾病的易感性以及疾病的分期分型、疗效观察和预后判断等。

　　3临床生化检验影响因素

　　临床生化检验作为应用最广泛的临床检查之一，在临床诊断中发挥着重要作用。

　　通过临床生化检验，能对患者的身体状况进行及时的了解，并及时发现一些疾病的先兆。检验前阶段主要是患者自身因素，主要包括生理因素（年龄、性别、情绪、运动、生活方式等）、药物因素、采集标本的因素、标本的储存与状态因素；检验中阶段主要是实验室环境、仪器、加样、检验试剂等因素的影响[8].因此，临床生化检验的准确性非常重要，须对临床生化检验的影响因素进行分析研究，提高其准确性。

　　4展望

　　电泳法和层析法是最基础也是最先发展起来的临床检测方法，操作简单，但消耗时间与成本；电化学法应用较广泛，具有选择性较好、操作简单、分析速度较快的优点；酶学与分子生物学技术是最新推出的检测方法，酶学分析技术具有专一性、高效性的特点，分子生物学技术则能快速而准确对疾病进行早期诊断、分期分型、疗效观察和预后判断；自动生化分析技术拥有高精密度与准确性，可以结合其他检测方法如酶学分析技术来进行更微量及快速的检测。

　　目前，临床检验医学正在从单一指标向"组学"方向逐步转化，不断改进质谱分析技术在代谢组学和蛋白组学领域的应用，使同时快速准确检测大量指标成为可能[9].

　　临床生化检验发展的同时也带来了巨大的挑战，加强临床医学间的互动交流，关注个体化诊疗和转化医学的重要性，利用新技术新手段寻找可用于早期诊断、靶向治疗的理想标志物，逐步推广普及新理论、新技术，并在临床中验证，建立临床检验医学发展体系，推动临床检验学科的全面发展，使检验医学在临床疾病的诊断治疗中发挥更加重要的作用。

　　参考文献：
　　[1]苗瑞霞。临床生物化学检验的概念及常用技术分析[J].中国药物经济学，2014（2）：177-178.
　　[2]过团文。临床生物化学检验的发展与展望[J].医学信息，2014,27（6）：449.