运用PCR技术对乙肝患者血清资料的检测分析

　　聚合酶链式反应(Polymerase　Chain　Reaction)，简称PCR［1］，是一种分子生物学技术，用于放大扩增特定的DNA片段。可看作生物体外的特殊DNA复制。我科近年来采用PCR技术对乙肝患者的血清资料进行检测分析，为比较PCR与传统检测方法的差异，特与采用传统检测手段患者资料进行对照分析，现综合报道如下。

　　一、资料与方法

　　1．一般资料:随机抽取于2013年6月在我院乙肝治疗的50例患者，年龄分布为20～60岁。调查的50例患者均为乙肝患者，全身均无系统性疾病和药物过敏史。患者需要进行采血、化验等辅助检查。现将50例患者随机分为实验组和对照组，实验组人数30人，男12人、女18人，对照组人数20人，男11人、女9人。分组完全按照随机分组的方法来进行分组，两组患者在年龄、性别及疾病原因等方面比较，差异不显著，不具有统计学意义，具有可比性。

　　2．纳入和评价标准:纳入标准:年龄在20～60岁的乙肝患者;没有免疫缺陷等疾病、智力正常、自然状况一切正常［2］;排除标准:存在感觉功能缺陷;先天性的疾病;高血压等。

　　3．方法:实验组采取PCR检测技术，对照组采取传统检验方法，即常规的物化检测。两组的用药方法用量相同，均采用局部浸润方法注射。对照组:常规检测技术;实验组:采用PCR技术，根据对乙肝患者抗原抗体检测的敏感度进行评价。

　　4．效果评价标准:观察检测抗原抗体的数量和灵敏度［3］作为评估标准。

　　5．统计学处理:采集到的数据采用SPSS15．0软件进行统计学分析，百分率(%)表示计数资料，定性资料的比较采用χ2检验，成组设计的t检验用于组间比较，当P＜0．05时，可认为差异有统计学意义。

　　二、结果

　　两组的检测效果统计情况见表1。

　　表中的数据显示P值小于0．05，表示调查结果具有统计学意义，即表明PCR技术对乙肝的检测优于传统学检测。

　　讨论PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温(经常是60℃左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72℃左右)，DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5＇－3＇)的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。医学检验是对病人的血液、体液、分泌物或脱落细胞等标本，进行化验检查，以获得病原、病理变化及脏器功能状态等资料。通过对患者的上述标本进行医学检验，达到对患者疾病进行诊断与辅助诊断的目的。

　　ELISA测定的是乙肝病毒表达的蛋白质(多肽)抗原或相应的抗体。FQ-PCR测定乙肝病毒DNA。检测HBV-DNA是判断乙肝病毒有无复制的“金指标”。ELISA方法测定乙肝五项指标依然是辅助诊断乙肝的常规方法，特别对急性乙肝的发现有重要作用，只是该方法对检测慢性乙肝表现得越来越不灵敏，特别是在乙肝病毒发生了变异以后，需要进行HBV-DNA检测才能确诊。在技术上，FQ-PCR采用荧光标记和闭管检测，克服了常规PCR扩增产物污染所致假阳性的缺点，使结果具有极高的特异性和敏感性。但在分析FQ-PCR结果时，还应考虑以下因素:FQ-PCR的反应体系复杂，易受多种因素影响。待测标本的溶血、脂血、处理不当都会导致其假阳性或假阴性;FQ-PCR只能检测血中游离的HBV-DNA，当病毒整合到肝细胞染色体上，随同肝细胞一起复制、表达时，ELISA可出现阳性反应，但血清中已没有HBV颗粒存在［4］，此时FQ-PCR为阴性反应;当患者感染的HBV-DNA发生突变，不能与荧光探针结合，FQ-PCR为阴性，而ELISA可为阳性;当患者处于恢复期或既往感染，ELISA检测乙肝五项指标可有多种模式。因此，在乙肝病毒感染的诊断上，二者有各自的优点，不可互相替代。

　　从表1研究结果可以看出，观察组采用PCR技术检测乙肝患者表面抗原，具有较高的检测敏感性，两组结果比较结果具有显著性差异。因此FQ-PCR检测定量HBV-DNA客观地反映了HBV感染、复制及病程变化，修正或补充了对ELISA测定结果的解释，特别是在病毒感染早期，ELISA不能检测到低滴度的病毒抗原时，FQ-PCR即可检测到HBV-DNA的复制，有利于乙肝的早期诊断。对于用干扰素等药物治疗的患者，测定治疗前后病毒核酸的拷贝数，有利于疗效观察及预后判断。

　　参考文献：
　　［1］李伟，李峰生，陈舒，等．乙肝病毒血清hbv-DNA标记物与血清的关系［J］．细胞与分子免疫学杂志，2011，24:818，821．
　　［2］成军，孙关忠．陈瑜，等．高低浓度血清中五项乙肝标志物的表现模式分析［J］．细胞与分子免疫学杂志，2012，17:443-444．
　　［3］林杓锋，李校坤，吴帆，等．实行定量PCR在乙型肝炎(HBV)诊断中的应用［J］．中国生物工程杂志，2012，22(3):68-70．
　　［4］张健，李宁，吕维红，等．HBV-DNA定量测定对乙肝五项的评价意义［J］．中华中医学杂志，2013，25(1):15-17．