肾脏病是一种代谢性疾病，近年来随着人们生活水平的提高，其发病率也不断上升。肾脏病后期会导致慢性肾功能衰竭，严重威胁着患者的生命。肾脏病患者需终身服药，目前临床治疗中常用药物主要有依那普利、氨苯蝶啶、呋塞米、缬沙坦等。但是这 4 种药物均具有一定的毒性，如依那普利在肾功能不全患者体内容易蓄积，氨苯蝶啶服用过量较易发生高钾血症和肾损害，呋塞米过量会出现肾毒性，缬沙坦过量会出现低血压伴随头晕等症状。因此在治疗过程中需要严格控制剂量，以减少长期服用对人体健康产生的危害。
尿液是唯一能够在无创条件下大量获得的体液，在临床诊断中相对稳定，可在较长的时间内不发生变化，因此近年来引起了人们越来越多的重视[1].而这 4 种常用药物中依那普利口服剂量的94% 左右以依那普利或其降解产物依那普利拉存在于尿液中。氨苯蝶啶口服剂量约 20% 会以原形排出至尿液中。口服呋塞米会有 88% 以原形经肾脏排泄，12% 经肝脏代谢由胆汁排泄。缬沙坦以原形药物代谢，70% 经胆道排泄，其余通过肾脏排泄。上述 4 种药物均可在尿液中找到其原形，且其含量与服药剂量有着直接的联系，因此可以通过监测尿液中这 4 种药物的含量，判定药物用量是否合适，避免药物过量服用。
目前这 4 种肾脏病常用药物含量测定的方法有高效液相色谱法（HPLC）[2-5]、气相色谱-质谱联用法[6,7]、液相色谱-质谱联用法[8-12]和紫外分光光度法[13-17]等，但上述报道多仅限于一种药物的分离与分析，其原因是这 4 种药物分子所含官能团种类不同，酸碱性具有较大的不同，导致彼此间疏水性差异较大，对 4 种药物同时分离与分析具有较大的困难。
针对该问题，本文建立了一种高效液相色谱方法用于快速分离分析尿液中这 4 种肾脏病常用药物，为临床治疗中根据个体情况确定用药剂量提供依据。
1 实验部分
1.1 仪器和试剂
高效液相色谱系统，包括 SPD-16 紫外-可见检测器和 LC Solution 工作站（岛津公司）。离心浓缩系统（Speed Vac Concentrator Iss 110）。马来酸依那普利片（江苏制药股份有限公司）；复方利血平氨苯蝶啶片（华润双鹤药业股份有限公司）；呋塞米片（江苏亚邦爱普森药业有限公司）；缬沙坦胶囊（北京诺华制药有限公司），其分子结构式见图 1.
乙酸铵（天津市盛奥化学试剂有限公司）；乙腈（色谱 纯）；高 纯 水 采 自 低 有 机 物 型 超 纯 水 机（FDY2002-SUV,青岛富勒姆科技有限公司）；其他试剂均为分析纯。所有试剂均直接使用，未经其他处理。
1.2 色谱条件
色谱柱：WondaSil C18-WR（150 mm×4. 6 mm,5 μm）；流动相：A 相为 10. 0 mmol / L 的乙酸铵水溶液（pH 3. 90），B 相为乙腈；梯度洗脱：0 ~ 3. 00min,5% B;3. 01 ~ 14. 00 min,5% B ~ 60% B;14. 01~ 16. 00 min,60% B ~ 80% B;16. 01 ~ 18. 00 min,80% B;流速：1. 0 mL / min;检测波长：254 nm;柱温：室温；进样体积：20 μL.
1.3 标准溶液的配制
首先采用 C18 固相萃取柱（WAT03590,100mg,沃特世科技有限公司）对市售依那普利、氨苯蝶啶、呋塞米、缬沙坦进行提纯。提纯后的药品经HPLC 分析，以保证其纯度。用 10. 0 mmol / L 乙酸铵水溶液（pH 3. 90）准确配成质量浓度分别为 3. 00×102、1. 00×102、7. 50×102、1. 00×102mg / L 的标准储备 液，于 冰 箱 冷 藏 保 存，备 用。分 别 用 10. 0mmol / L 乙酸铵水溶液逐级稀释上述标准储备液，配制含依那普利、氨苯蝶啶、呋塞米、缬沙坦质量浓度 0. 15 ~ 300 mg/ L、0. 05 ~ 100 mg/ L、0. 75 ~ 750mg / L、0. 05 ~ 100 mg / L 的系列混合标准溶液。
