金品肿痛系列药物为云南省药物研究所自主研发的特色外用系列药物,同时也为云南彝医传统用药,是云南省药物研究所依据彝族秘方经科学验证后开发,研制而成的民族药.现该制剂存在多种剂型,为比较各类剂型的优劣性,指导临床用药,对金品肿痛系列药物不同剂型,不同给药方式的体外透过情况进行研究.由于金品肿痛系列药物主要为外用制剂,使用过程中主要给药途径为经皮给药,因而皮肤的屏障作用是决定药物渗透速度的关键,药物的透皮能力对药物的吸收有直接影响.
金品肿痛系列药物由近 20 种中药组成,消肿止痛,活血化瘀,舒经活络,化痞散结.主要用于跌打损伤,风湿关节炎,肩周炎,痛风关节炎,乳腺小叶增生.其中所含栀子苷具有镇痛、抗炎、治疗软组织损伤等作用.栀子苷结构简单,稳定性好,相对质量分数高,出峰峰形好,利于计算.因此,选栀子苷作为指标成分.
1 仪器与试药
1. 1 仪器
RYJ - 6A 型药物头皮扩散试验仪( 上海黄海药检仪器厂) ; PL203 电子精密天平( 上海梅特勒 - 托利多仪器有限公司) ; 电热恒温水浴锅( 北京市光明医疗仪器厂) ; 高效液相仪( Agilent1200,美国) ; 超声仪( HS6150D) .
1.2试药
金品肿痛搽剂(云南省药物研究所自制);金品肿痛气雾剂(云南省药物研究所自制);桅子有对照品(批号:110703 - 200322,规格:20 mg) ;甲醇(色谱纯);无水乙醇( 分析纯) ; 氯化钠( 分析纯; 上海国药集团) ; 乙腈( 色谱纯) ; 蒸馏水为重蒸水.
1. 3 动物
昆医种雄性小鼠
2 实验方法
2. 1 离体皮肤处理
昆明种雄性小鼠断颈处死后,用剪刀小心剪去小鼠腹部的绒毛后,用剃须刀刮净,注意不能弄破皮肤.迅速剥离小鼠腹部皮肤,清理残余的皮下组织和脂肪,侵入生理盐水中,备用.
2. 2 体外透皮试验条件
本文中涉及到的体外透皮试验装置为改良的 Franz 扩散池; 水浴温度为( 31 ±0. 1) ℃; 接收液为 30% 乙醇生理盐水; 接收池体积为 7 mL; 释放面积为 10. 747 cm².
2. 3 体外透皮试验方法
取 6 个 Franz 扩散池,标注为 1、2、3、4、5、6 号,分别覆于经处理的雄性小鼠皮肤,在扩散池内注入接收液并充满,第 1 组实验分别在 1 -6 号皮肤角质层侧定量注入 2 mL 肿痛搽剂,第二组实验分别在 1 ~6 号皮肤角质层侧定量喷入2 mL 肿痛气雾剂,第 3 组实验分别在 1 - 6 号皮肤角质层侧定量注入 2 mL 肿痛气雾剂.向上排出气泡后置水浴中加热并计时,分别于 1、2、4、6、12、24、48、72 h 取样,全部取出接收液,每次取样后重新注满接收液,并排除扩散池中的气泡.将 1、2、4、6、12、24、48、72 h 取样的接收液置于置于蒸发皿中,60 ℃水浴蒸干,1、2 h 样品甲醇定容至 1 mL,制成供试品溶液;4、6、12 h 样品甲醇定容至 2 mL,制成供试品溶液;24、48、72 h 样品甲醇定容至5 mL,制成供试品溶液.
2. 4 接收液中栀子苷的 HPLC 测定方法.
2. 4. 1 色谱条件 色谱柱 Phenomenex( 4. 6 mm × 250 mm,5 μm) ,流动相为乙腈 - 水( 15 ∶ 85) ; 流速 1 mL / min; 检测波长 238 nm; 柱温 30 ℃.进样量: 10 μL,运行时间为 25min,甲醇为空白对照.此条件下栀子苷能很好分离,见图1 ~ 3.
2. 4. 2 标准曲线的制备 精密称取干燥后的栀子苷对照品 12. 5 mg 于容量瓶中,加甲醇定容到 50 mL,制成对照品溶液.分别精密量取 0. 2、0. 5、0. 7、1. 0、2. 0、4. 0、6. 0、8. 0、10. 0 mL 置于 10 mL 容量瓶中,加甲醇定容.0. 45 μm 滤膜过滤,按 2. 4. 1 项下色谱条件测定,记录峰面积.以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程为: Y= 15. 354X + 1. 6115 ( R2= 0. 9999 ) ,线性范围 0. 05 ~2. 5 mg.
2. 4. 3 精密度试验 ①日内精密度试验: 取标准曲线项下标准品溶液,按上述色谱条件重复进样 6 次,测定栀子苷峰面积,RSD 值为 0. 15%.②日间精密度试验: 取标准曲线项下标准品溶液,按上述色谱条件每日重复进样 3 次,连续3 d.测定栀子苷峰面积,RSD 值为 1. 65% .
2. 4. 4 重复性试验 取同一时间点的接收液 6 份,分别置于蒸发皿中,60 ℃ 水浴蒸干,甲醇定容至 5 mL.经 0. 45μm 滤膜过滤,按上述色谱条件,测定栀子苷峰面积,RSD值为 1. 11%.
2. 4. 5 稳定性试验 取同一份体外经皮渗透液,于蒸发皿中,60 ℃水浴蒸干,甲醇定容至 10 mL,分别放置 0 h、2 h、4h、6 h、24 h、72 h 定量进样,测定栀子总皂苷峰面积,RSD值为 1. 47%.
2. 4. 6 加样回收率试验 将同一时间点的 9 份接收液,分别加入高、中、低 3 个浓度的栀子苷对照品溶液,分别置于 60 ℃水浴蒸干,甲醇定容至.按上述色谱条件,测定栀子苷峰面积.计算回收率,高、中、低3 个浓度的回收率分别为100.93%,98.60%,100.19%,平均回收率为99. 91%.
3 结 果
3. 1 金品肿痛搽剂( 涂搽给药) 的累积透过曲线测定
将上述第1 组实验结果,1 ~72 h 的1 ~6 号各接收液按要求制成供试品,经上述色谱条件测定.根据计算各时间点的累积透过量,绘制体外经皮渗透曲线图,结果见表1.
以 t0. 5为横坐标,以 Q 为纵坐标,绘制累积透过曲线,进行拟合.结果见图 4.
3. 2 金品肿痛气雾剂( 喷射给药) 的累积透过曲线测定
将上述第 2 组实验结果,1 ~72 h 的 1 ~6 号各接收液按要求制成供试品,经上述色谱条件测定.根据计算各时间点的累积透过量,绘制体外经皮渗透曲线图,结果见表2.
以 t0. 5为横坐标,以 Q 为纵坐标,绘制累积透过曲线,进行拟合.结果见图 5.
3. 3 肿痛气雾剂( 涂搽给药) 的累积透过曲线测定将上述第3 组实验结果,1 ~72 h 的1 ~6 号各接收液按要求制成供试品,经上述色谱条件测定.根据计算各时间点的累积透过量,绘制体外经皮渗透曲线图,结果见表3.
以 t0. 5为横坐标,以 Q 为纵坐标,绘制累积透过曲线,进行拟合.结果见图 6.
4 结 果
金品肿痛搽剂( 涂搽给药) 体外 24 h 累积透过量为57. 3082 μg / cm²; 稳态透皮速率( J) 为 11. 96 μg/cm²; 金品肿痛气雾剂( 喷射给药) 体外 24 h 累积透过量为 52. 1414μg/cm²; 稳态透皮速率( J) 为 7. 444 μg/cm²; 金品肿痛气雾剂( 涂搽给药) 体外 24h 累积透过量为 38. 1809 μg/cm²; 稳态透皮速率( J) 为 9. 737 μg/cm².
5 结 论
由以上结果可知: 金品肿痛气雾剂采用喷射给药方式时在 0 ~2 h 有明显快速释放过程,随后释放趋势逐渐减缓,至 72 h 释放量已较微弱.证明金品肿痛气雾剂是速释制剂,急性使用时能发挥快速、明显的药效.金品肿痛搽剂在 6 ~24 h 释放量最高,且能在 24 h 有最高的累积透过量( 57. 3082 μg/cm²) ,适宜作为长效制剂长期给药.同一制剂采用喷射给药能使药物快速经皮渗透,采用涂搽给药释药较均匀平稳,但释放周期过长( 72 h 仍有较高渗透量) ,可作为进一步剂型开发的基础.
6 讨 论
金品肿痛系列药物的体外透皮试验证明,该系列药物作为经皮给药制剂,不经过胃肠道系统,可以避免胃肠道的破坏作用和肝脏的"首过效应",提高药物的生物利用度,能比较持续稳定的发挥疗效,降低不良反应.
临床使用中,可针对用药需求对气雾剂和搽剂进行选择,能更合理的指导用药,减少浪费,提高疗效.
本文中采用的栀子苷检测方法为药典方法,同时也是金品肿痛系列产品质量标准中的栀子苷含量检测方法,但体外皮肤渗透实验未用过此方法,经方法学验证,此检测条件可用做金品肿痛系列药物体外透皮实验接收液的栀子苷检测.
参考文献
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