摘 要： 非洲猪瘟 (African swine fever, ASF) 是由非洲猪瘟病毒 (African swine fever virus, ASFV) 感染所致的猪的一种病程短、病死率高的急性传染病, 其病理变化比猪瘟更严重, 特征之一是淋巴细胞有明显的核崩解现象[1]。非洲猪瘟不感染人, 不会对人类生命构成直接威胁, 但人类不可因此而轻视, 因ASF对食品安全会带来很大的影响, 疫情的发生会引起猪群的严重疾病甚至死亡, 造成生产机能的急剧下降, 间接影响人类健康。本文将带领读者了解非洲猪瘟的发生与流行, 着重阐述非洲猪瘟的病原学与实验室诊断技术。
关键词： 非洲猪瘟; 流行病学; 病原学; 实验室诊断技术;
1 、非洲猪瘟的发生与流行
非洲猪瘟缘起非洲, 据资料显示, 20世纪初, 东部非洲的肯尼亚首次确认非洲猪瘟疫情, 此后, 陆续蔓延至欧美。近年来, 疫情更是向亚洲侵袭, 毫不讳言, 对于非洲猪瘟, 人类若控制不力, 疫情还有向周边国家乃至全球扩张的趋势。
自2018年8月3日沈阳市确诊非洲猪瘟疫情[2]以来, 如今, 全国已有10余个省份公布非洲猪瘟疫情。猪肉是我国居民生活消费的主要肉品, 广泛的猪肉贸易流通量, 更是有利于疫情的扩散, 这对我国生猪养殖业和居民身体健康造成了巨大危害, 应引起我国民众高度重视。
2、 非洲猪瘟病原学
2.1、 分类
ASFV经国际病毒分类委员会多次讨论, 归为双链DNA病毒目 (dsDNA) 、非洲猪瘟病毒科 (Asfarviridae) 、非洲猪瘟病毒属 (Asfivirus) 。目前, ASFV是非洲猪瘟病毒科的唯一成员。
2.2 、病毒的形态与结构
ASFV颗粒[3]为正20面体对称结构, 核心是DNA, 直径为70～100nm, 成熟的病毒颗粒外周有两层以上的衣壳, 衣壳外有囊膜。一条线性双链DNA分子构成了ASFV的基因组。病毒粒子主要由5个多肽组成, 空衣壳含有2个多肽, 分别为vp72 (MW76000) 和vp73 (MW50000) , 膜由vp1 (MW125000) 和vp4 (MW44000) 组成, vp5 (mw39000) 可能与病毒的DNA有关。
3 、非洲猪瘟流行病学
3.1、 传染源
以病猪、患病后康复猪和隐形感染猪为主。病猪在该病发生前1～2d可经鼻咽部排出。
3.2、 传播途径
主要通过直接或间接接触带毒的病猪[4]而感染, 通过静脉、肌肉、腹腔和鼻内接种含毒物品均可导致发病, 带毒猪的排泄物或尸体也是传播媒介之一。蜱、蚤、虱是ASFV的虫源媒介, 病毒存在于它们的胆管中, 通过吸食血液散播疫情。
3.3、 易感动物
各种品种和日龄的猪以及改良野猪都可感染。
3.4 、发病症状
潜伏期5～15d, 主要伴随高热、发绀、淋巴结及内脏严重出血。猪只感染后, 体温短时间升至42℃并持续高热状态, 随后体温下降有精神沉郁、厌食、腹泻、便血、呼吸困难的症状。最急性型会有无明显症状的突然死亡[5]。急性型的病猪皮肤表面呈现出血点, 可视黏膜潮红, 眼鼻有黏液, 粪便表面有血液。受孕母猪在妊娠的任一阶段均可流产。亚急性型以及慢性型体温波动无规律, 呼吸困难, 关节肿胀, 且持续时间较长。
4、 非洲猪瘟实验室诊断技术
发病猪和病死猪的全血、组织、分泌物和排泄物中均可能含有病毒, 因内脏器官的广泛性出血症状明显, 故在采集病料时需先通过剖检观察各器官组织的病理变化, 结合生前检查进行综合分析, 采集的脏器应尽可能全面。
4.1、 采集样品
4.1.1、 病原学检测样品
抗凝血液的采集:由猪耳静脉或前腔静脉取血。用注射器吸取枸橼酸钠或肝素抗凝剂, 静脉采血5mL, 颠倒、转动混匀后, 注入试管或小瓶中加塞[6]。
鼻液的采集:用灭菌棉棒蘸取鼻黏膜上的分泌物, 置于灭菌试管内或加有抗生素的肉汤中。
脾、淋巴结、肝、肺等实质器官的采集:其中, 脾脏为首选器官, 淋巴结次之。肉眼所见有病理变化或无明显变化的脾脏、淋巴结都应在采集样品范围内。以无菌操作剪去直径1cm左右的组织样品, 加入含100μg/mL青霉素和链霉素的PBS溶液中, 4℃保存运输, 到达实验室后, 立即放入-80℃低温冰箱内冷冻保存。此外, 病猪粪便、仔猪尸体和流产胎儿以及蜱也可送检。
4.1.2、 血清学检测样品
针对不同病程的猪应分别采集并做好标识, 避免样品混乱影响实验结果。如上述抗凝血液采集, 无菌采血3～5mL, 室温放置12～24h, 收集血清, 置一消毒的青霉素小瓶或样品管内, 封口、标识后送检。
4.2、 血清学诊断技术
4.2.1、 酶联免疫吸附试验 (ELISA)
在国际贸易中, ASFV的检测指定方式为ELISA。
如同其他病原体的ELISA试验方法, 使用灭活的全病毒或表达的抗原包被固定在固相载体上 (聚苯乙烯板) 。当血清样品中含有ASFV特异性抗体时, 会与吸附在板上的抗原结合。相反, 若不含特异性抗体, 则不能与抗原结合。如果加入针对包被抗原的特异性酶标单抗, 则会与血清中的抗体竞争结合。
若血清中含有非洲猪瘟特异性抗体, 酶标单抗就不能与包被的抗原结合, 如果血清中不含特异性抗体, 酶标单抗就与抗原结合。洗涤后, 除去酶标板中未结合的物质, 加入特异性底物后, 如果存在酶标单抗, 就会出现颜色反应。
4.3、 病原学诊断技术
4.3.1、 血细胞吸附试验 (Haemadsoption Test, HAD)
当怀疑有ASF发生时, 可将下列样品送往实验室进行血细胞吸附试验:抗凝血 (用肝素或EDTA作抗凝剂) 、脾脏、扁桃体、肾脏、淋巴结。
猪血液中的红细胞能吸附在体外培养的感染ASFV的巨噬细胞表面, 通过将病料组织感染巨噬细胞后, 在细胞病变前加入红细胞, 若在巨噬细胞周围形成典型的玫瑰花环, 则证明病料组织中含有ASFV。HAD实验特异性较高, 但会有些毒株迅速诱导巨噬细胞产生病变而无法观察到血细胞吸附现象。
4.3.2、 直接免疫荧光检测ASFV抗原 (Fluorescent antibody test, FAT)
将抗ASFV特异性抗体用荧光素标记, 在一定条件下与相应抗原反应, 检测ASFV抗原。该方法已经普遍应用于目前ASF疫情发生国家的证实性检测。
FAT可检测野外可疑猪或实验室接种猪脾脏、扁桃体、肾脏、淋巴结组织中的抗原。在接种敏感细胞后, FAT还可以用于区分CPE是ASFV产生还是其他病毒产生的。但对亚急性或慢性ASF病例, FAT检出敏感性明显降低, 可能与感染猪体内抗原抗体复合物的形成有关。这种抗原抗体复合物能干扰甚至阻断ASFV抗原与结合物之间的结合。
试验进行时, 应注意荧光标记[7]抗体的浓度, 染色温度常采用25℃。
在我国, 非洲猪瘟属一类疫病[8], 对疑似疫情的猪只应高度重视, 及时上报相关部门, 选择具备相应资格的样品采集单位、运送单位和病料样品存储单位, 按照专家要求及时、安全送检, 运用合适的实验室诊断技术, 严格汇报检测结果, 针对病畜以不放血方式捕杀, 尸体按规定处理, 做好现场的消毒工作。疫情发生后做好相应的应急措施, 切忌盲目用药, 应及时上报并求助官方兽医部门, 尽量避免或降低不必要的经济损失和社会影响。
参考文献
[1]尚红梅, 吴旭锦, 朱小甫.非洲猪瘟的流行现状及防控措施[J].今日畜牧兽医, 2019, 35 (02) :23-24.
[2]赵永坡, 李荣达, 韩志英, 陈公武, 吴志钢.一例非洲猪瘟的防治[J].今日畜牧兽医, 2019, 35 (02) :93.
[3]刘梅芬, 刘影, 王翠, 赵雪丽, 谢彩华, 闫若潜.非洲猪瘟的扩散风险点及防控对策[J].中国动物检疫, 2019, 36 (02) :47-49.
[4]李娟, 戚南山, 吕敏娜, 吴彩艳, 林栩慧, 胡俊菁, 肖文婉, 张健騑, 廖申权, 孙铭飞.非洲猪瘟的生物媒介及其防治策略[J].广东畜牧兽医科技, 2019, 44 (01) :1-4.
[5]忻悦.非洲猪瘟的症状及鉴别诊断[J].上海农业科技, 2019 (01) :68-69.
[6]尚红梅, 安加俊, 杨萍, 王满定.非洲猪瘟的流行病学及其扩散风险[J].今日畜牧兽医, 2019, 35 (01) :11+10.
[7]格桑卓嘎, 四郎玉珍, 吴金措姆, 班旦, 旦增曲珍, 索朗曲吉, 拉巴次旦.浅谈非洲猪瘟的危害与防控措施[J].今日畜牧兽医, 2019, 35 (01) :12-13.
[8]郭万里.非洲猪瘟的诊断及防控措施[J].当代畜禽养殖业, 2019 (01) :40.
