银杏酚酸广泛存在于银杏的根、梗、叶、果和外种皮中，它可看作是 6 － 烷基或 6 － 烯基水杨酸的衍生物，根据侧链碳原子数目及单双键的不同主要有白果新酸( C13∶ 0) 、白果酸( C15∶ 1) 、十七烷二烯银杏酸( C17∶ 2) 、氢化白果酸( C15∶ 0) 、十七烷一烯银杏酸( C17∶ 1) 等 5 种［1］。研究表明，银杏酚酸具有生物学毒性，有抗炎、抗过敏、抑菌及防治病虫害等作用［2］，是当前国际上治疗心脑血管疾病药物。国际上规定，银杏叶提取物中银杏酚酸的含量必须低于 5 μg/g。因此，建立准确的银杏酸分析方法显得尤其重要。银杏酚酸的分析一般用高效液相色谱法［3］和高效液相—质谱联用法［4］，也有用分光光度计分析的报道［5］。本实验采用简单的预处理方法，建立了银杏叶药材中所含有的全部银杏酸的HPLC 测定方法，为银杏叶提取物及其制剂的质量监控和安全性评价提供参考。
1 仪器与试药
1． 1 仪 器
美国 Agilent1100 高 效 液 相 色 谱 仪、超 声 波 清 洗 机( HS20500D) 、天平( AB204 － S) 。
1． 2 试 药
白果新酸对照品( 中国生物制品鉴定所，批号: 110713 －200609) ，总银杏酸对照品 ( 中国生物制品鉴定所，批号:110713 － 200609) ，甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为娃哈哈纯净水( 杭州娃哈哈集团有限公司) 。
2 色谱条件
Pntulips BP － C18 ( 4． 6 × 250 mm，5 μm) 柱，检测波长:310 nm，流动相: 甲醇—1% 冰醋酸 ( 95: 5) ，流速: 1． 0 ml /min，柱温: 30℃ 。理论板数按白果新酸峰计算应不低于4000。
3 线性关系考察及检测限、定量限
3． 1 标准溶液的制备
分别称取白果新酸、总银杏酸对照品适量，加甲醇溶液分别制成 0. 426 mg/ml、0. 292 mg/ml 的白果新酸、总银杏酸的对照品溶液。
3． 2 标准曲线的绘制
分别精密吸取白果新酸对照品溶液 0. 4、0. 9、1. 4、1. 9、2. 4 μl 注入高效液相色谱仪，测定峰面积值，以峰面积( A)对进样量( C) ，进行线性回归，得白果新酸性回归方程: y =475634x + 1. 425，r2= 0. 9999，线性范围 0. 1704 ～ 1. 0224 μg。
分别精密吸取总银杏酸对照品2、4、6、8、10 μl 注入高效液相色谱仪，测定峰面积值，以峰面积( A) 对进样量( C) ，进行线性回归，得总银杏酸线性回归方程: y = 376918x + 7． 86，r2=0. 9996，线性范围 0. 584 ～ 2. 92 μg。说明在此线性范围内峰面积与进样量呈良好的线性关系。结果见表 1、表 2。
3． 3 检测限和定量限
以白果新酸测定检测限和定量限。结果检测限( 信噪比3∶ 1) : 检测浓度为 0. 0006 mg / ml; 定量限( 信噪比 10∶ 1) :检测浓度为 0. 0020 mg/ml。
4 样品溶液的制备
4． 1 测定白果新酸供试品溶液的制备
精密称取银杏叶药材 2 g，精密加入石油醚( 60 ～ 90℃)50 ml，称重，回流提取 1． 5 h，放冷，再称重，补足减失重量，过滤。精密吸取滤液 25 ml，回收溶剂至干，分次加入 10 ml甲醇，超声至残渣溶解，过滤，移至 10 ml 容量瓶中，过微孔滤膜滤过，即得。
4． 2 测定总银杏酸供试品溶液的制备
精密称取银杏叶药材 0． 5 g，精密加入石油醚( 60 ～90℃ ) 20 ml，称重，回流提取 1． 5 h，放冷，再称重，补足减失重量，过滤。精密吸取滤液 10 ml，回收溶剂至干，分次加入5 ml 甲醇，超声至残渣溶解，过滤，移至 5 ml 容量瓶中，过微孔滤膜滤过，即得。
5 方法学考察
5． 1 精密度试验
取测定白果新酸供试品溶液( 贵州三号) ，精密吸取 3μl，连续进样 6 次，测定相应峰面积。取测定总银杏酸供试品溶液( 贵州六号) ，精密吸取2 μl，连续进样6 次，测定相应峰面积。白果新酸 ＲSD% 为 0． 45%，总银杏酸 ＲSD% 为0. 66% ，结果表明精密度良好。结果见表 3、表 4。
5． 2 稳定性试验
精密吸取测定白果新酸供试品溶液( 贵州三号) 、测定总银杏酸供试品溶液( 贵州六号) 3、2 μl，按照“2”项下所述的色谱条件，分别于 0、2、4、6、8、12 h 测定，白果新酸 ＲSD =0. 47% ，总银杏酸 ＲSD = 0. 94% ，说明各供试品溶液在 12h内稳定。结果见表 5、表 6。
5． 3 重复性试验
按“4． 1”项下所述的方法平行处理 6 次，分别精密吸取测定白果新酸供试品溶液( 贵州三号) 、测定总银杏酸供试品溶液( 贵州六号) 3、2 μl，同法测定白果新酸、总银杏酸，白果新酸 ＲSD =2. 35%，总银杏酸 ＲSD = 2. 39%，说明供试品溶液的重复性良好。其结果见表 7、表 8。
5． 4 回收率试验
精密称取已知含量的银杏叶各 6 份，分别加入各对照品，照供试品溶液制备项下的方法处理，测定各成分的峰面积，计算回收率，结果见表 9、表 10。
6 样品含量测定
分别精密称取银杏叶药材，照供试品溶液制备项下的方法处理进样测定，用外标法计算银杏叶中白果新酸和总银杏酸的含量。银杏叶中白果新酸和总银杏酸的含量以 5 次测得的平均值计，结果见表 11。
7 讨 论
10 个样品测定结果表明，由于产地的差异，银杏叶药材中银杏酸含量有很大差别。为控制银杏叶药材的质量，保障临床应用的安全性，对银杏酸进行限量检查有重要意义。
银杏叶中银杏酚酸以 C13 ～ C17 银杏酚酸的形式存在，结构上具有相似性和规律性，分别为白果新酸、白果酸、十七烷二烯银杏酸、氢化白果酸、十七烷一烯银杏酸。
实验选择的流动相系统有: ① 甲醇—1% 冰醋酸( 95∶5) ; ② 甲醇—3% 冰醋酸( 85∶ 15) ; ③ 甲醇—1% 冰醋酸( 90∶ 10) ; ④ 乙腈—1% 冰醋酸( 90 ∶ 10) 。结果表明，甲醇—1% 冰醋酸( 95∶ 5) 在液相色谱中 5 个峰的分离度较好。
参考文献:
［1］ 田亚平，尤文元，李 娜． 荧光分析法测定银杏酚酸［J］． 分析化学，2006，34( 研究简报特刊) :S155 －S157．
［2］ 倪学文，吴谋成． 银杏酚酸的分离鉴定及其抗菌活性研究［J］． 食品科学，2004，25(9) : 59 －63．
［3］ 仰榴青，吴向阳，陈 钧． 高效液相色谱法测定银杏外种皮中银杏酸的含量［J］． 分析化学，2002，30(8) : 901 －905．
［4］ 邓永智，袁东星，陈 猛，等． 正己烷萃取 － HPLC － MS 联用测定中成药银杏浸膏中微量烷基酚酸含量［J］． 食品科学，2003，24(12) : 107 －110．
［5］ 仰榴青，吴向阳，陈 钧，等． 银杏酸的分光光度法测定［J］． 分析化学，2004，32(5) : 661 －664.
