灌肠液Ⅱ号由黄柏、连翘、蒲公英、黄芩、大黄、青黛等药材组成.具有清热解毒、凉血燥湿、活血化瘀、止痢润肠、排脓止痛的功效.主要用于治疗慢性非特异性溃疡性结肠炎,适用于肠黏膜充血水肿,血管纹理不清,大便次数增多,便不成形,便中带脓者.本试验采用薄层色谱法对处方中黄柏、连翘、蒲公英、黄芩、大黄、青黛进行薄层色谱鉴别.
1 仪器与试药
仪器:HP1100 高效液相色谱仪(Anglient company),包括G1322A 真空脱气机,G1311 双泵,G1314 紫外检测器,Hp 化学工作站.
滤膜 0.45um,Φ0.25mm(上海兴亚净化材料厂).
硅胶 G 薄层板,青岛海洋化工厂(供薄层层析用).
黄柏、连翘、蒲公英、黄芩、大黄、青黛阴性样品自制.
中药饮片(经包头市药检所鉴定,均符合文献[1]规定.购于包头市金草堂医药有限责任公司).
灌肠Ⅱ号液本院制剂室自制;甲醇为色谱纯;其他试剂均为分析纯.
2 薄层色谱鉴别
2.1 连翘的薄层色谱鉴别:照成品方法制备连翘的阴性对照液.
分别取样品溶液和阴性对照液各 15ml,用氯仿振摇提取 3次,每次 20ml,合并氯仿提取液,蒸干,残渣加甲醇 2ml 使溶解,作为供试品溶液和阴性对照品溶液.
另取连翘对照药材 1g,加水 50ml,煎煮 1h,滤过,取滤液30ml,自样品"加氯仿振摇提取"起同法制备,作为对照药材溶液.
另取连翘苷对照品,加甲醇制成每 1ml 含 2mg 溶液,作为对照品溶液.
照薄层色谱法试验吸取上述溶液供试品溶液、阴性对照品溶液和对照药材溶液及对照品溶液各 2μl,分别点于同一硅胶G 薄层板上,以甲苯∶丙酮∶乙酸乙酯∶甲酸∶水(7∶8∶5∶1∶1)的上层液为展开剂,展开、取出、晾干.喷以香草醛硫酸试液,加热至斑点显色清晰.供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,而阴性对照品溶液没有.
2.2 黄芩的薄层色谱鉴别:照成品方法制备黄芩的阴性对照液
分别取样品溶液和阴性对照液各 30ml,用稀盐酸调节 pH至 2,用乙酸乙酯振摇提取两次,20ml/次,合并乙酸乙酯提取液,蒸干,残渣加甲醇 1ml 使溶解,作为供试品溶液和阴性对照品溶液.
另取黄芩对照药材 1g,加水 50ml,煎煮 1h,滤过,取滤液30ml,自样品"加乙酸乙酯振摇提取"起同法制备,作为对照药材溶液.另取黄芩苷对照品,加甲醇制成每 1ml 含 1mg 溶液,作为对照品溶液.
照薄层色谱法试验吸取上述溶液供试品溶液、阴性对照品溶液和对照药材溶液及对照品溶液各 10μl,分别点于同一硅胶G 薄层板上,以乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水(5∶3∶1∶1)为展开剂,展开、取出、晾干.喷以1% 三氯化铁乙醇溶液.供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的 斑点,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的 斑点,而阴性对照品溶液没有.
2.3 蒲公英的薄层色谱鉴别:照成品方法制备蒲公英的阴性对照液
分别取样品溶液和阴性对照液各 30ml,用乙酸乙酯振摇提取两次,20ml/次,合并乙酸乙酯提取液,蒸干,残渣加甲醇 1ml使溶解,作为供试品溶液和阴性对照品溶液.
另取蒲公英对照药材1g,加水50ml,煎煮1h,滤过,取滤液30ml,自样品"加乙酸乙酯振摇提取"起同法制备,作为对照药材溶液.再取咖啡酸对照品,加甲醇制成每 1ml 含 0.5mg 溶液,作为对照品溶液.
照薄层色谱法试验吸取上述溶液供试品溶液、阴性对照品溶液和对照药材溶液及对照品溶液各 5μl,分别点于同一硅胶G 薄层板上,以甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸(5∶3∶1)的上层液为展开剂,展开、取出、晾干.置碘蒸汽中熏至斑点显色清晰.供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,而阴性对照品溶液没有.
2.4 青黛的薄层色谱鉴别:照成品方法制备青黛的阴性对照液
分别取样品溶液和阴性对照液各 30ml,用氯仿振摇提取三次,20ml/次,合并氯仿提取液,挥干至约 1ml,作为供试品溶液和阴性对照品溶液.另取青黛对照药材 1g,加水 50ml,煎煮 1h,滤过,取滤液30ml,自样品"加氯仿振摇提取"起同法制备,作为对照药材溶液.
再取靛玉蓝、靛玉红对照品,加氯仿分别制成每 1ml 含 1mg的溶液,作为对照品溶液.照薄层色谱法试验吸取上述溶液供试品溶液、阴性对照品溶液和对照药材溶液及对照品溶液各 5~10μl,分别点于同一硅胶 G 薄层板上,以苯∶氯仿∶丙酮(5∶4∶1)为展开剂,展开、取出、晾干.供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,而阴性对照品溶液没有.
2.5 黄柏的薄层色谱鉴别:照成品方法制备黄柏的阴性对照液
分别取样品溶液和阴性对照液各 20ml,加盐酸 2ml,用乙酸乙酯振摇提取两次,20ml/次,弃去乙酸乙酯液,水层用氨试液调节 pH 至 12,用三氯甲烷振摇提取两次,15ml/次,合并三氯甲烷液,蒸干,残渣加甲醇 1ml 使溶解,作为供试品溶液和阴性对照品溶液.
另取黄柏对照药材 1g,加水 50ml,煎煮 1h,滤过,取滤液30ml,自样品"加盐酸 2ml"起同法制备,作为对照药材溶液.再取盐酸小檗碱对照品,加甲醇制成每 1ml 含 0.1mg 溶液,作为对照品溶液.
照薄层色谱法试验吸取上述溶液供试品溶液、阴性对照品溶液和对照药材溶液及对照品溶液各3μl,分别点于同一硅胶 G 薄层板上,以二甲苯∶乙酸乙酯∶异丙醇∶甲醇∶浓氨试液(10∶6∶3∶3∶1)为展开剂,另槽内加入等体积的浓氨试液,预饱和数分钟后,展开、取出、晾干.置紫外灯(365nm)下检视.供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,而阴性对照品溶液没有.
2.6 大黄的薄层鉴别:照成品方法制备大黄的阴性对照液
分别取样品溶液和阴性对照液各 10ml,加盐酸 1ml,水浴加热 30min,立即冷却,用乙醚提取三次,每次 10ml,合并乙醚提取液,挥取乙醚,残渣加甲醇 1ml 溶解,作为供试品溶液和阴性对照溶液.
另取大黄对照药材 1g,加甲醇 20ml,超声处理 30min,冷却,过滤,挥去甲醇,残渣加水 10ml 使溶解.照供试品溶液处理方法,自"加盐酸 1ml"起,同法处理,作为对照药材溶液.再取大黄素,大黄酚对照品,加甲醇分别制成每 1ml 含 1mg的溶液,作为对照品溶液.
照薄层色谱法试验吸取上述溶液供试品溶液和阴性对照品溶液各 10μl,对照药材溶液和对照品溶液各 4μl,分别点于同一硅胶 G 薄层板上,以石油醚(30℃~60℃)∶甲酸乙酯∶甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂,展开、取出、晾干,置紫外灯(365nm)下检视.在供视品色谱中,与对照药材色谱相应的位置上,显 5 个相同的橙黄色荧光斑点,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的橙黄色荧光斑点,而阴性对照 品 溶 液 没有.置氨蒸汽中熏蒸后,日光下检视,斑点变为红色.
3 讨 论
采用薄层色谱法鉴别黄柏、连翘、蒲公英、黄芩、大黄、青黛.结果显示该方法简便、专属性强、重复性好.在建立鉴别的基础上进行了黄芩苷含量测定的研究,由于重现性差而放弃.
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社,2005,304,328,391,392[2]吴泽军,王爱良,刘水平,等.黄连上清片质量控制方法的研究[J].中国药学杂志,2003,38(12):954-956.
