羌黄颈康丸是漯河市第一人民医院制剂室配制的特色制剂，由羌活、姜黄、秦艽、当归、柴胡、赤芍、防风、桂枝、黄芪、葛根、黄芩等 11 味中药制成，具有祛痹止痛、益气活血的功效，临床上主要用于治疗风寒湿痹、气血不足所致的颈椎病。
文献报道，葛根素具有包括抗氧化、抗缺血再灌注损伤、心肌保护、改善血液流变学指标等多种生理功能，对心脑血管疾病具有很好的医疗保健作用。原有的河南省批准质量标准没有含量测定项，为提高该药的质量标准，本实验参考有关文献，采用 HPLC 法测定葛根素的含量，实验结果表明，该方法简便、快速、准确，能够有效控制制剂质量。
1 仪器与试药
Waters e2695 型高效液相色谱仪，empower 液相色谱工作站，Waters 2489 紫外检测器，葛根素对照品（批号：110752-200410，由中国药品生物制品检定所提供，含量测定用）。羌黄颈康丸由漯河市第一人民医院提供（批号：20131212、20131216、20131218、20140402、20140404、20140406）。甲醇为色谱纯，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶 Waters C18（4.6mm×150mm,5μm）；柱温：35℃，流动相：甲醇∶水（21∶79）；流速：1.0ml/min，检测波长：250nm，理论板数按葛根素峰计算应不少于 2000。
2.2 对照品溶液的制备：精密称取葛根素对照品适量，加 50%乙醇制成 1ml 含 15μg 的溶液，即得。精密吸取 5μl，进样，测定，结果见图 1。【图1】
2.3 供试品溶液的制备：取本品约 2g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 50%乙醇 50ml，密塞，称定重量，放置 1h，超声处理（250W，50MHz）30min，放冷，再称定重量，用 50%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。精密吸取 5μl，进样，测定，结果见图 2。【图2】
2.4 阴性干扰试验：按照处方中药味的比例，配制不含葛根的群药，按其工艺制成阴性制剂，再按照上述供试品溶液的制备方法制成阴性液，精密吸取 5μl，进样，测定，见图 3。结果阴性液在葛根素对照品相同的保留时间处未显色谱峰，表明无干扰，方法专属性良好。【图3】
2.5 线性关系考察：精密称取葛根素对照品 5.06mg，置 50ml 量瓶中，加 50%乙醇溶解并定容至刻度，即得（每 1ml 含葛根素101μg）。精密吸出上述溶液 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml，分别置于 10ml 量瓶中，加 50%乙醇至刻度，摇匀。分别精密吸取 5μl，按上述色谱条件进样，测定峰面积。以峰面积（Y）为纵坐标，葛根素进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程为：Y=6.49×107X-4.84×106，r=0.9996 （n=6），结果表明葛根素在0.0505～0.303μg 范围内与峰面积线性关系良好。
2.6 稳定性试验：取批号 20140402 羌黄颈康丸，制备供试品溶液，在室温下放置 0、1、2、4、8、12h 后分别进样，测定峰面积，结果峰面积平均值为 625967，RSD 为 1.6%，表明待测组分浓度在12h 内无明显变化，化学性质稳定。
2.7 精密度试验：取批号 20140402 羌黄颈康丸，制备供试品溶液，按照上述色谱条件，分别精密吸取 5μl，连续进样 6 次，测定峰面积。结果峰面积平均值为 628541，RSD 为 0.5%（n=6）,结果表明仪器精密度良好。
2.8 重复性试验：取同一批号（批号：20140402）羌黄颈康丸，依法平行制备 5 份供试品溶液并测定其含量，结果求得羌黄颈康丸中葛根素平均含量为 0.786mg/g，RSD 为 0.9%（n=5）。
2.9 回收率试验：取已知葛根素含量（0.786mg/g）的羌黄颈康丸（批号：20140402）样品 6 份，研细，取约 1g，精密称定，分别精密加入葛根素对照品约 0.8mg，照供试品溶液的制备方法制备溶液并依法测定峰面积，计算回收率。结果见表 1。【表1】
结果表明，本方法回收率较好。
2.10 样品含量测定：分别取 3 个批次的样品，依法制备并测定其葛根素的含量，结果见表 2。【表2】
3 讨 论
3.1 检测波长的选择：取葛根素对照品适量，加 50%乙醇制成1ml 含 30μg 的溶液，在 200～400nm 波长范围内进行紫外扫描，结果在 250nm 处有最大吸收，故选择 250nm 作为检测波长。
3.2 提取方法的选择：参照《中国药典》，根据葛根素的性质，选择 50%乙醇作为提取溶剂，进行超声和回流提取两种方法的比较，考察结果见表 3、4。【表3-4】
结果表明，超声提取 30min 后，样品中葛根素已基本提取完全，提取率可达到回流提取的 95%以上，鉴于超声处理的方法简便易行，故采用超声提取的方法。
3.3 流动相的选择：参照清眩治瘫丸（《中国药典》2010 年版一部）含量测定方法及有关文献，本实验采用甲醇∶水（21∶79）为流动相，在色谱图中，葛根素色谱峰与相邻组分峰分离度良好，峰形符合要求，背景无干扰，操作简单可行。
参考文献
[1] 夏华玲. 葛根素的药理作用研究进展 [J]. 时珍国医国药，2006，17（3）：434-435.
[2]刘宏，王兰英，任建国.高效液相法测定脑栓康复浓缩丸葛根中葛根素的含量[J].北方药学，2013，10（1）：6-7.
[3]阮毅铭.HPLC 法测定葛根配方颗粒中葛根素的含量[J].黑龙江医药，2008，21（5）：19-21.
[4]国家药典委员会.中国药典[S].第 1 部，北京：化学工业出版社，2010.
