滕州市瘦挛性咳嗽患儿的病原学分析
咳嗽是人体对呼吸道的分泌物、已经侵入呼吸道的异物，还有渗出物的清除，清除进入人体的有害因子的过程，是一种保护性反射。近年来，痉挛性咳嗽患儿呈上升趋势，研究不同年龄患儿痉挛性咳嗽的病原学，找出其致病因素，从而采取有效的干预措施，对于患儿的治疗和疾病的快速恢复，有很大的价值，可以节约大量医疗资源，做到有的放矢，有很好的经济效益和社会效益。目前，痉挛性咳嗽患儿的治疗研究较多，关于病原学的研究，主要针对百日咳杆菌的研究，而对于痉挛性咳嗽的其他病原的研究较少，没有专门系统研究痉挛性咳嗽的病原学分布情况。美国近几年研究发现，百日咳发病率有上升趋势，考虑与疫苗接种后效果下降有关，并且百日咳治疗周期长，并发症较多，因而预防显得尤为重要，在美国，疾病预防控制中心调整了疫苗接种的时间，增加了青少年及成人高危人群的疫苗接种工作，在美国，百日咳疫苗的接种率很高，美国疾病预防控制中心认为，百日咳是可以通过接种疫苗进行预防的疾病⑴。但国外的研究不适合中国国情，国内的病原学分布及疾病规律与国外有很大的区别。国内在此方面的研究尚存在不足。为了 了解中国百日咳发病情况，为调整疫苗接种工作提供科学依据，中国疾病预防与控制中心在全国进行流行病学调查项目，在山东省及新疆维吾尔自治区两个点进行，其中山东省选择滕州市中心人民医院及莱芜中心医院进行，滕州市中心人民医院儿科负责临床资料收集工作。该项目由山东省疾病预防与控制中心负责，由山东省疾病预防与控制中心提供新鲜羊血制作百曰咳细菌培养基，专门人员已经由山东省疾病预防与控制中心培训3个月，已经工作近1年时间，聚合酶链式反应（PCR）方法查百日咳DNA,由我院收集鼻咽拭子，由山东省疾病预防与控制中心直接检测，百日咳抗体检测由我院进行，山东省疾病预防与控制中心进行督导检查，流行病学调查由滕州市疾病预防与控制中心预防保健科进行。
本研究采取对滕州市痉挛性咳嗽患儿做病原学分析，包括常规痰培养查细菌，百日咳杆菌培养及多联酶链方法查百日咳抗体及聚合酶链式反应PCR法检测患者鼻咽部分泌物百日咳杆菌DNA,呼吸道病原九项检测抗体IgM,并同时检查血常规、超敏C反应蛋白、胸部正位片、胸部CT、儿童肺功能检测、支气管舒张试验、过敏原检测、呼出气一氧化氮（NO）检测等，以求找出疾病的病因，并对不同年龄段的患儿病原学进行分析，找出各年龄段病原分布特点及规律，为治疗提供可靠的依据。
对象与方法
1.1对象
选取滕州市2013-11月至2014-9月以痉挛性咳嗽为主要临床表现的患儿152例，其中男86例，女66例，年龄1月一 12岁，进行病原学检测，同时检查血常规、超敏C反应蛋白、胸部正位片、胸部CT、儿童肺功能检测、支气管舒张试验、过敏原检测、呼出气一氧化氮（NO）检测等，其中5月以下52例，5月一5岁74例，5岁以上26例。痉挛性咳嗽标准为阵发的、成串的、接连不断的咳嗽。选取对照组85例患儿，为非疫挛性咳嗽，与痉挛性咳嗽不同，为单声或不连续咳嗽，由有经验医师决定入组标准，同时进行病原学检查，以及其他检查，需要进行的检查种类由医师决定，并取得家人的同意。由于百白破（白喉类毒素、百日咳菌苗、破伤风类毒素）疫苗接种为生后3个月幵始初种、每月1次、共3次，5月后结束疫苗接种，5岁后抗体滴度低于保护水平，因而将患儿分为5个月以下、5月一5岁、5岁以上3个组，百日咳菌苗为无细胞菌苗。百日咳诊断标准：1、临床表现为痉挛性咳嗽，2、实验室检查：PCR方法检测百円咳DNA阳性或血清学检测百日咳IgM阳性。
1.2方法：
1.2.1痰细菌培养：就诊当日对患儿进行深部吸痰做常规细菌培养，患儿入院后先由经验丰富的护士进行深部吸痰处理，进行痰培养，然后进行治疗。
1.2.2百日咳奸菌培养：用专用鼻咽拭子釆集棉棒，由经过专门培训的医师对患儿采集鼻咽拭子，采集部位为鼻后部1/3处，鼻腔内侧，由山东省疾病预防控制中心提供新鲜羊血配制培养基，做百日咳杆菌培养。
1.2.3多联酶链反应检测百日咳抗体IgM、IgG.此项工作由专人进行，抽血当天进行检测，人员已经在山东省疾病预防控制中心实验室进行专业培训。
1.2.4分子生物学检测：聚合酶链式反应PCR法检测患者鼻咽部分泌物百日咳杆菌DNA,由我院专人采集标本，由山东省疾病预防控制中心进行检测，标本同时进行百日咳杆菌培养。该方法敏感、特异，有确诊意义。1.2.5呼吸道九项病原检测：就诊当日抽取静脉血，用间接免疫突光法检测嗜肺军团菌、q热立克次体、腺病毒、肺炎支原体、甲型流感病毒、呼吸道合胞病毒、乙型流感病毒、肺炎衣原体、副流感病毒等抗体IgM,试剂由西班牙VIRCELL公司提供，郑州安图代理。
1.2.6血常规检测：包括血常规、白细胞总数、淋巴细胞数、中性粒细胞数、超敏C反应蛋白。
1.2.7胸部正位片、胸部CT等：部分有发热的患儿，咳嗽症状重，需要做胸部正位片、胸部CT
1.2.8儿童肺功能检查：部分患儿仅表现为痉挛性咳嗽，无其他表现，咳嗽时间较长，做儿童肺功能检查，查FEVi （-秒钟用力呼气容积）、PEF （呼气峰值流速）。支气管舒张试验：患儿肺功能检查出现异常时，可以进行支气管舒张试验，试剂为葛兰素史克生产的万托林气雾剂（沙丁胺醇）60楸/支，先进行患儿的肺通气功能检测，测定FEVi值，吸入万托林气雾剂200微克，等待15分钟再测FEVi的数值大小，改善率大于20%为支气管舒张试验阳性。
1.2.9过敏原检测：对部分疫宁性咳嗽、长期咳嗽患儿，考虑有过敏性咳嗽、咳嗽变异性哮喘的患儿，对其做过敏原检测，采用皮内法（用丹麦埃克瑞公司生产的皮肤点刺液进行20种试剂皮肤点刺试验，包括屋尘螨、粉尘螨等，用生理盐水为阴性对照，组胺为阳性对照，++以上为阳性），抽血查吸入及食物组过敏原，及血总IgE.
1.2.10呼出气一氧化氮（NO）测定：在潮气状态下取患儿的呼出气，测定患儿的一氧化氮，大于年龄+8为阳性结果，阳性代表气道高反应性，存在咳嗽变异性哮喘的可能。
