Th17 细胞是一类新近发现的 CD4+T 细胞,研究发现,Th17 细胞在防御细菌感染、介导慢性炎症以及自身免疫病中发挥重要作用.寻常性痤疮,特别是中重度痤疮,临床表现为大量的丘疹、脓疱甚至结节、囊肿,明显的炎性皮损.本研究通过研究中重度痤疮患者外周血IL-17 水平以及 Th17 细胞占外周血CD4+细胞比例,探讨 Th17 细胞在中重度痤疮发病及治疗中的作用,并探讨加味五味消毒饮治疗中重度痤疮的疗效及可能机制.
1 材料与方法
1.1 研究对象 随机选取 2012 年 7 月-2013 年 8月我院门诊寻常性痤疮[2]患者77 例.按照 Pillsbury法[2]分为轻度痤疮组 32 例,男 14 例,女 18 例,年龄14.2~38.3 岁,平均(22.5±5.2)岁;病程 3 个月~8 年,平均(2.3±0.6)年.中重度痤疮组 45 例,男 20 例,女25 例,年龄 14.5~35.5 岁,平均(21.3±4.2)岁;病程 3个月~9 年,平均(2.6±0.9)年.中重度痤疮组患者随机分为治疗组 25 例,男 12 例,女 13 例,年龄 13.6~36.2 岁,平均(23.1±6.2)岁;病程 6 个月~6 年,平均(2.5±0.8)年.对照组 20 例,男 8 例,女 12 例,年龄(15.6~40.3)岁,平均(22.5±5.2)岁;病程 8 个月~9年,平均(2.6±1.1)年.无痤疮正常体检者 30 名为健康对照组,男15名,女15名,年龄16.4~40.6岁,平均(22.5±5.2)岁.所有研究对象2个月内均未使用皮质类固醇激素、免疫抑制剂、抗生素治疗.
本研究经温州医学院附属第二医院伦理委员会批准,并同研究对象签署知情同意书.各组年龄、性别、病程差异均无统计学意义(P>0.05).
1.2主要试剂 培养基RPMI1640购自Hyclone公司;灭活胎牛血清,购自晶美生物公司;人IL-17ELISA试剂盒为美国Rapidbio公司产品;淋巴细胞分离液购自由上海华精生物公司;人Th17Flow试剂盒为美国eBioscience 产品.
1.3 治疗方法 治疗组内服中药方剂加味五味消毒饮:金银花30g,紫花地丁、野菊花各 15g,蒲公英、白花蛇舌草、海藻各 30g,昆布 15g,陈皮 10g,青皮 6g,当归、川芎各 10g,1 天 1 剂,水煎服,治疗 8 周.对照组予异维A 胶丸(商品名:泰尔丝)10mg,口服,1 天3 次,疗程 8 周.所有患者均外用夫西地酸软膏(商品名:奥络),1 天 2 次.
1.4 实验方法
1.4.1 血清样本以及细胞准备 抽取研究对象外周血 3mL,室温静置 30min,以 1500r/min 离心 15min,取其上清液,于-20℃保存备用,剩余样本加 PBS 液稀释 1 倍混匀后加入分离液 Ficoll-Hypaque,以1500r/min离心 10min,收集单个核细胞,用 RPMI1640培养液重悬细胞,调整细胞浓度为 2×106/mL.
1.4.2 IL-17检测 上清液用人IL-17ELISA 试剂盒,以及多功能微孔板分析仪,检测出各血清吸光度,通过绘制标准曲线计算出标本中IL-17 浓度.
1.4.3 流式细胞术检测 Th17 细胞 按人 Th17Flow试剂盒操作说明书,加入渗透洗脱缓冲液重悬细胞,分别加入FICT 标记的人 CD4 抗体和 PE 标记的人IL-17A 抗体,作流式细胞术分析,用 Th17 细胞占外周血CD4+细胞比例评价 Th17 细胞水平.
1.5 统计学方法 应用 SPSS13.0 统计软件,计量资料数据以(x±s)表示,采用单因素方差分析和配对资料t 检验,计数资料采用 Radit 分析.以 P<0.05 为差异具有统计学意义.
2 结 果
2.1 疗效标准
痊愈:治疗前后皮损总数减少90%以上;显效:治疗后皮损总数减少 60%~89%;好转:治疗后皮损总数减少 30%~59%;无效:治疗后皮损减少 30%以下或加重.
2.2三组 Th17 细胞相关指标比较 中重度痤疮组IL-17与Th17细胞均高于健康对照组和轻度痤疮组,差异有统计学意义(P<0.05).
轻度痤疮组与健康对照组间差异无统计学意义(P>0.05),见表1.
2.3中重度痤疮患者两组疗效比较 治疗组25例中痊愈7 例(28.0%),显效 9 例(36.0%),好转 5 例(20.0%),无效 4 例(16.0%),总有效率 84.0%.对照组20 例中痊愈 6 例(30.0%),显效 7 例(35.0%),好转4 例(20.0%),无效 3 例(15.0%),总有效率85.0%.两组疗效差异无统计学意义(P>0.05).
2.4 中重度痤疮患者 Th17 细胞相关指标比较 中重度痤疮患者治疗后IL-17、Th17 细胞均明显下降(P<0.05),见表 2.
2.5 不良反应 治疗组 25 例出现轻度腹泻 3 例,停药后症状消失;对照组20 例出现口唇干燥脱屑 17例,血甘油三酯增高3 例,谷丙转氨酶轻度增高 2例,停药1 个月后,症状消失,血液检查恢复正常.
3 讨 论
轻度痤疮病理表现为毛囊漏斗内的角化细胞潴留及毛囊漏斗部囊状扩张,炎性细胞浸润较少.中重度痤疮病理表现为毛囊漏斗上皮破裂,中性粒细胞、淋巴细胞、巨嗜细胞、异物巨细胞聚集,明显的炎症临床及病理表现.
我们研究发现,寻常性痤疮患者皮损炎症程度与外周血 Th17 细胞和 IL-17 有相关性,中重度痤疮患者外周血Th17 细胞和 IL-17 明显高于健康对照组以及轻度痤疮患者(P<0.05),而轻度痤疮患者与正常对照组之间无显着差异.这些结果提示,Th17 细胞可能在中重度痤疮炎症性的皮疹形成中发挥重要作用[4].加味五味消毒饮由五味消毒饮合海藻、昆布、陈皮、当归、川芎、青皮组成,具有清热解毒,凉血清肿,活血祛瘀,软坚散结功效.维甲酸类药物具有抗炎活性,抑制皮脂腺活性、减少皮脂分泌、减慢上皮细胞角化、抑制痤疮丙酸杆菌的作用.临床用于痤疮特别是中重度痤疮治疗[5].
本组结果显示,加味五味消毒饮和异维 A 酸治疗中重度痤疮,外周血 IL-17 和外周血中 Th17 细胞占 CD4+细胞的比例均下降.显示异维 A 酸有抑制炎症反应的作用.而加味五味消毒饮治疗后外周血Thl7细胞及其效应因子 IL-17 明显降低,可能与该方剂抑制炎症作用机制有关.但加味五味消毒饮对中重度痤疮的治疗机制以及下调Th17 细胞及其细胞因子的机制还有待进一步研究.
参 考 文 献
[1] Bettelli E,Korn T,Kuchroo VK.Th17:the third member ofthe effector T cell trilogy[J].Curr Opin Immunol,2007,19(6):652-657.
[2]赵辨.中国临床皮肤病学[M].南京:江苏科学技术出版社,2009:1165-1169.
[3]中华人民共和国卫生部.中药新药临床研究指导原则(第三辑)[S].北京:中国医药科技出版社,1997:89-90.
[4]马新华,邵文俊,金宛宛,等.寻常痤疮皮损炎症程度与外周血 Th17 细胞和 IL-17 的关系[J].中国麻风皮肤病杂志,2014,30(2):79-81.
[5]周展超.国产异维 A 酸治疗寻常痤疮的 10 年回顾[J].中华皮肤科杂志,2007,40(5):320-321.
