高效液相色谱法,自上世纪世纪六十年代崛起,经过不断的发展,从理论、实践方面日臻完善,应用范围较广,涉及医药领域、环境保护、生命科学、石化等基础和应用领域。大多数有机化合物可以用HPLC 来分析测定。在药物分析机分离中的应用尤其广泛,发展尤其快速。按分离机理的不同,主要有:吸附色谱法、液-液分配色谱法、离子交换色谱法、分子排阻色谱法、亲和色谱法、手性色谱法等。高效液相色谱法自五年版《中国人民共和国药典》收载以来,在药物分析领域的应用发展迅速,药品质量控制中的作用日益突显,已发展成为一种主流的色谱分析方法。
1 高效液相色谱法在有效成分分析中的应用。
1.1 黄酮类化合物中的应用。
中药的成分复杂多样,多数含有黄酮类化合物,也是天然药物中非常重要的一类化合物,随着黄酮类化合物的广泛研究,其分析和分离的手段不断得到改进,高效液相色谱法在析和分离黄酮类化合物方面的应用也非常广泛。田娜等人采用制备液相色谱法,从荷叶中分离和制备了一类黄酮化合物。方法是采用 60%乙醇回流提取,粗提取液浓缩,以 D-101 柱与聚酰胺色谱分离,后经 SymmetryPrepTMC18 柱分离,采用水-乙腈为流动相,进行梯度洗脱,流速以5ml/min,最后分析出 3 种黄酮类化合物。利用紫外、红外、核磁共振、质谱等分析,确定以上三个化合物分别为紫云英苷、异槲皮苷和金丝桃苷。三种化合物的纯度都达到了 97%以上。其中紫云英苷为首次从荷叶中分离[1].Justesen 等采用液相质谱联用技术对 15 种药材中的黄酮进行了分析和分离,分析发现欧芹的芹菜素含量最高,达到了 510-630mg/100g[2].Chen 等研究漆树黄酮在小鼠体内的代谢,采用 HPLC 分离漆树黄酮及其代谢物,并采用质谱和 HPLC,最终确定了代谢产物的化学结构[3].
1.2 皂苷类化合物中的应用。
皂苷类成分也属于中药中常见的活性成分,多数没有紫外吸收,或者只有末端吸收,易受试剂干扰,因此使用紫外检测法有一定的局限性。采用用高效液相色谱与蒸发光检测器,可以有效检测皂苷类成分。在分析浙麦冬、川麦冬中麦冬皂苷 D 含量的应用较好[4],在对酸枣仁中酸枣仁皂苷的含量测定[5],柴胡中柴胡皂苷的含量测定[6],黄芪中黄芪甲苷的含量测定[7],天麻中天麻苷含量测定[8]都取得很好的分析效果。
2 HPLC-ELSD 在中药分析中的应用。
一方面中药的化学成分很多,结构复杂,其中一些成分不存在紫外吸收,有的只在紫外末端有吸收。另一方面,色谱分离困难和流动相存在干扰,致使紫外检测在定性定量方面的分析有一定的难度。而 ELSD 在一定程度上弥补了此方面的不足,因此应用较广在糖类成分、内酯类成分、皂苷类成分、氨基酸、萜类成分和生物碱类成分等其他成分分析中,得到了较好的分析效果[9].
3 结束语。
中药成分的复杂性和多样性却是现代中药研究者们所头疼的问题,同时也在制约中药制剂的发展和临床上的应用,中药的资源不断地丰富与发展,但质量却远远没有一个科学的量化标准体系,而实现这些就得通过精密的分析和检测手段。作者通过对相关资料的查阅,综述了高效液相色谱法在黄酮、皂苷、糖类等中药化学成分中的分析和分离方面的应用,HPLC 法具有良好的分离性能、选择性好、分析速度快、适用范围广、样品用量少、灵敏度高等诸多优点。
参考文献:
[1]田娜,刘仲华,黄建安,等。高效制备液相色谱法从荷叶中分离制备黄酮类化合物[J].色谱,2007(1):88-92.
[2]Justesen UJ,knuthsen p.Composition of flavnoids in fresh herbsand calculation of flavonoid intake by use of herbs in traditionalDanish dishes [J].Food chemistry,2001(73):245-250.
[3]Chen H,Zuo Y G,Deng Y W.Separation and determination offlavonoids and other phenolic compounds in cranberry juice by high-performance liquid chromatography [J].J.Chromatogr.A.2001,913:387-395.
[4]俞建平,马月光,邵建峰,等。ELSD-HPLC 法测定浙麦冬、川麦冬中麦冬皂苷 D 含量的方法研究 [J]. 中药新药与临床药理,2002,13(4):253.
[5]李会军,李萍。高效液相色谱-蒸发光散射检测器测定酸枣仁中酸枣仁皂苷 A 及 B 的含量[J].药物分析杂志,2000,20(2):82.
[6]陈妍。HPLC-ELSD 法测定柴胡中柴胡皂苷 a、d 的含量[J].天津药学,2002,14(3):73.
[7]田南卉,杨国红,方颖,等。高效液相色谱-蒸发光散射器测定黄芪甲苷的含量[J].药物分析杂志,2000,20(3):199.
[8]魏泱,丁明玉,李红霞。高效液相色谱-蒸发光散射和紫外检测法测定天麻中天麻甙含量[J].高等学校化学学报,2001,22(4):563.
[9]黄永焯,王宁生。HPLC/ELSD 在天然药物分析中的应用[J].中药新药与临床药理,2001,12(6):444.