癫痫是一种反复发作的神经系统疾病，需长期用药才能控制发病，有的患者甚至需要终身用药。苯巴比妥（ PB） 、苯妥英钠（ PH） 和卡马西平（ CBZ） 是临床常用的抗癫痫药物，广泛应用于儿童患者。PB 主要用于癫痫大发作及癫痫持续状态，PH 是治疗癫痫大发作和局限性发作的首选药物，CBZ 是治疗单纯性局限性发作和大发作的首选药物之一[1].这三种药物治疗指数低、安全范围窄、个体差异大，使用不当易致疗效不佳或严重不良反应。因其血药浓度与疗效和毒性关系密切，故监测其血药浓度可提高临床用药的有效性和安全性。本研究以艾司唑仑为内标，建立了同时测定 PB、PH、CBZ 三种药物血药浓度的高效液相色谱（ HPLC） 方法，现报道如下。
1 仪器和试药。
1. 1 仪器。
Agilent1260 高效液相色谱仪（ G1314F 紫外检测器，Chemstation 工作站） ; AUW220D 电子天平（ 日本岛津） ;TG16-W 微量高速离心机（ 长沙湘仪离心机仪器有限公司） ; WH-2 微量旋涡混合仪（ 上海沪西分析仪器厂） .
1. 2 试药。
PB 对照品（ 171222-201201 ） 、PH 对照品（ 100210-201110） 、CBZ 对照品（ 100142-201105） 、艾司唑仑对照品（ 171219-201112） 均购自中国药品生物制品检定所（ 供含量测定用） .甲醇为色谱纯，乙酸乙酯为分析纯，水为二重纯化水。
2 方法和结果。
2. 1 色谱条件。
色谱柱 Hypersil ODS2（ 150 mm×4. 6 mm,5 μm） ,检测波长 240 nm,柱温 25 ℃，流速 0. 9 mL/min,进样量10 μL,流动相甲醇-水（ 54 ∶ 46） .以内标法定量。
2. 2 对照品溶液配制。
精密称取 PB 对照品 13. 03 mg 于 25 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得浓度为 0. 521 2 mg/mL 的 PB 对照品溶液，取 2 mL 于 25 mL 容量瓶中，再用甲醇定容，得浓度为 41. 70 μg/mL 的 PB 对照品溶液。
精密称取 PH 对照品 11. 33 mg 于 25 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得浓度为 0. 453 2 mg/mL 的 PH 对照品溶液，取 2 mL 于 25 mL 容量瓶中，再用甲醇定容，得浓度为 36. 26 μg/mL 的 PH 对照品溶液。
精密称取 CBZ 对照品 9. 25 mg 于 25 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得浓度为 0. 370 0 mg/mL 的 CBZ 对照品溶液，取 2 mL 于 25 mL 容量瓶中，再用甲醇定容，得浓度为 29. 60 μg/mL 的 CBZ 对照品溶液。
精密称取艾司唑仑对照品 10. 10 mg 于 25 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得浓度为 0. 404 0 mg/mL 的艾司唑仑对照品溶液，作为内标溶液备用。
2. 3 血浆样品处理。
精密量取血浆样品 400 μL 于 10 mL 离心管中，加内标溶液 10 μL、乙酸乙酯 3 mL,混匀，3 000 r/min 离心10 min,取上清液用氮气吹干，加 100 μL 甲醇复溶，取10 μL 进样。
2. 4 标准曲线及线性范围。
结果见表 1.取空白血浆，分别加入不同量的 PB、PH 和 CBZ 对照品溶液，混匀，作为标准曲线系列浓度标准品，按“2. 3”项下方法处理，用内标法定量，分别计算得三药标准曲线的回归方程。
2. 5 专属性实验。
结果见图 1.PB、PH、CBZ 及内标物艾司唑仑出峰处无杂质干扰，峰形尖锐，保留时间分别为 4. 6、8. 9、10. 5、14. 3 min.
2. 6 精密度实验。
分别配制低、中、高三个不同浓度的 PB、PH、CBZ 混合血浆样品，按“2. 3”项下方法处理，每个浓度平行测定5 次，连续测定 5 d,记录测得浓度，计算日内、日间精密度（ RSD） 及相对偏差。三种药物低、中、高三个不同浓度的日内、日间 RSD 均<6%,相对偏差均<8%.
2. 7 提取回收率实验。
取“2. 6”项下低、中、高浓度的三种药物混合血浆样品各 5 份，按“2. 3”项下方法处理，测得各浓度下峰面积与相应浓度对照品溶液直接进样所得峰面积之比即为提取回收率，结果 PB、PH、CBZ 提取回收率分别为91. 50% 、89. 20% 、95. 80% .
2. 8 稳定性实验。
取“2. 6”项下低、中、高浓度的三种药物混合血浆样品，-20 ℃冷冻后分别于 24 h 和 7 d 后室温解冻测定，或二次冻融测定，每次相隔 12 h,评价不同存放条件下PB、PH、CBZ 的稳定性。 结果三药浓度的相对偏差均<8%.
3 临床应用。
选取2012 年1 月至2014 年6 月我院确诊为癫痫并接受 PB、PH 或 CBZ 治疗的患儿，共 618 例次，其中单用PB 364 例次，单用 PH 45 例次，单用 CBZ 122 例次，联用PB 和 PH 7 例次，联用 PB 和 CBZ 54 例次，联用 PH 和CBZ 26 例次，无同时使用三种药物的患儿。应用本研究所建立的方法进行血药浓度监测，应用 SPSS 11. 5 软件处理数据，结果见表 2.
4 讨论。
采用高效液相色谱法（ HPLC） 同时测定癫痫患者血中苯巴比妥（ PB） 、苯妥英钠（ PH） 、卡马西平（ CBZ） 浓度的研究[2-4]多数采用外标法，本研究采用内标法可减少仪器稳定性因素带来的误差，使结果更准确。本研究选用的流动相甲醇-水（ 54 ∶ 46） 、内标物艾司唑仑简单易得，且内标物与三种目标药物分离良好，保留时间相近。
邹海洋[4]的研究血样处理中先采用磷酸盐溶液沉淀蛋白，再用乙酸乙酯提取，操作繁琐。本研究直接用乙酸乙酯提取，操作步骤简单、回收率较高，实际效果表明，杂质峰少、分离度好。
儿童属于特殊用药人群，肝肾等器官功能尚未发育完全，常规药物代谢动力学参数不能完全适用。对需长期服用的抗癫痫药物 PB、PH、CBZ 进行血药浓度监测，可有效控制用药剂量，保证治疗效果，为制定个体化用药方案提供依据。PB、PH、CBZ 都具有肝药酶诱导作用，应注意联合用药时，血药浓度较低也会有很好的抗癫痫效果，此时不宜以单用时的有效血药浓度进行参考。
血药浓度监测结果结合临床实际分析： （ 1） 14 例次PB 血药浓度达到了中毒浓度范围（ PB 中毒血药浓度范围 40 ~60 μg/mL,致死血药浓度>80 μg/mL[5]） ,最高血药浓度为 54. 31 μg/mL.有 2 例次出现轻度中毒症状，其中 1 例次出现嗜睡，血药浓度 46. 72 μg/mL; 1 例次出现感觉迟钝，血药浓度 50. 24 μg/mL.（ 2） 3 例次 PH 血药浓度超过了有效血药浓度范围（ 10 ~ 20 μg/mL） ,但未达到中毒血药浓度（ PH 中毒血药浓度>40 μg/mL,致死血药浓度>100 μg/mL[5]） ,均未出现中毒症状。（ 3）20 例次 CBZ 血药浓度达到了中毒血药浓度（ CBZ 中毒血药浓度>12 μg/mL[5]） ,最高为 16. 28μg/mL.4 例次出现中毒症状，其中 2 例次出现恶心呕吐，2 例次出现少尿。（ 4） 三种药物血药浓度超过最大有效血药浓度时，虽然总有效率可达 100%,但不能说明血药浓度越高效果越好，而引起的药物不良反应应引起高度重视。
参考文献：
[1]杨宝峰。 药理学[M]. 第 7 版。 北京： 人民卫生出版社，2010: 133-136.
[2]翁爱彬，方剑英，郑荔莉。 RPHPLC 法同时测多索茶碱和3 种抗癫痫药血药浓度[J]. 湖南中医药大学学报，2013,33（ 6） : 79-81.
[3]张志国，李 冬，方 芳。 苯巴比妥、苯妥英钠及卡马西平血清药物浓度检测方法验证[J]. 黑龙江医药科学，2010,33（ 5） : 43.
[4]邹海洋。 测定 PB、DPH、CBZ 在血清中的药物浓度[J]. 广州化工，2011,39（ 6） : 115-116.
[5]李焕德。 临床药学[M]. 第一版。 北京： 中国医药科技出版社，2007: 188,196.
