原因不明复发性流产患者的免疫治疗成效观察

　　复发性流产(recurrent abortion)是指连续 2 次及 2 次以上的自然流产。病因包括胚胎因素、母体因素、免疫功能异常和环境因素等。除此之外，临床上仍有 50% －60% 患者病因不明，称为原因不明反复流产(unexplained recurrentspontaneous abortion，URSA) 。随着生殖免疫学的飞速发展，近年研究认为，大多数 URSA 是由免疫功能异常引起。对母体来说，胚胎及胎儿属于同种异体移植物。母体对胚胎及胎儿的免疫耐受是胎儿在母体内得以生存的基础。母体抗封闭抗体产生不足是引发流产的危险因素。

　　对本院产科及医学遗传科门诊原因不明复发性流产患者的抗封闭抗体(HLA －Ⅰ型及 HLA － Ⅱ型)检测，其中两型抗体均为阴性的进行免疫治疗，观察其临床疗效。

　　1 资料与方法

　　1. 1 一般资料 2010 年 1 月至 2012 年 11 月，产科门诊及医学遗传科门诊因复发性流产就诊的夫妇，排除 (1)女性患者生殖器官解剖异常，(2)双方外周血染色体异常，(3)女方内分泌异常，(4)女方 TORCH 感染，(5)母儿血型不合因素，(6)女方糖代谢异常，(7)女方除封闭抗体外的免疫抗体异常，(8)男方精液异常等因素。

　　1. 2 方法 (1) BA 检测:抽取患者外周血 2ml，分离血清，采用酶联免疫吸附法(ELISA)，严格按照试剂盒要求进行实验，结果用酶标仪读数。试剂由美国 OL 生产，北京索奥生物技术有限公司分装提供。HLA － Ⅰ型及 HLA － Ⅱ型均为阴性者进行系统的免疫治疗。(2)免疫治疗:双方进行传染病四项(乙肝，丙肝，梅毒，艾滋病毒)检测，均为正常者进行治疗(男方其中一项感染可以选择无关个体代替其抽血)。抽取男方肝素抗凝外周血 20ml，加入 6ml 生理盐水稀释后缓慢加入装有 18ml 分离液(天津美德太平洋科技有限公司生产)通讯作者:申华的离心管中。500g/min 离心 20min。取淋巴细胞层，装入无菌离心管中，20ml 生理盐水洗涤 2 次，在显微镜下观察，调成20 － 40 × 106淋巴细胞悬液，注射于女方前臂皮内，分6 －8 点注射。每 3 周治疗一次，四次为一疗程。治疗结束后 2 － 4周复查抗体的产生。产生抗体者受孕后继续治疗 4 次，至孕20 周止。若 6 个月内没有受孕则需复查封闭抗体。以妊娠持续满 20 周为治愈标准。

　　1. 3 统计学方法 采用 SPSS13. 0 软件进行分析，卡方检验。

　　2 结 果

　　2. 1 239 例患者进行了 BA 检测，其中 HLA －Ⅰ型及 HLA－ Ⅱ型均为阳性的 5 例，其中一项阳性的 21 例。两项均为阴性的 213 例，阴性患者占所有受检者的 89. 12%。

　　2. 2 213 例均为阴性的患者中 169 例接受了免疫治疗。治疗 4 次后 BA 一项以上阳转者 151 例，随访到 106 例妊娠，其中 98 例成功妊娠至 20 周及以上，8 例再次发生早期自然流产或胎停育。妊娠成功率 92. 45%。

　　2. 3 未经免疫治疗的 44 例中，追踪到 32 例妊娠，其中 5 例成功，27 例再次自然流产。与 BA 阳性患者比较差异具有极显着统计学意义(χ2= 76. 64，P ＜ 0. 01)
　　
　　3 讨 论

　　从生殖免疫学观点来看，妊娠是一种成功的半同种移植，而流产则被认为是半同种移植的失败。继而研究发现，反复流产患者夫妻间白细胞抗原相容性增强，由此导致妊娠妇女对胚胎父系同种抗原呈低识别或低反应，以致无法产生足够的保护性抗体或封闭抗体，而使胎儿遭受免疫打击而流产。近年来的研究进一步证实，妊娠的成功有赖于妊娠妇女对妊娠半同种抗原所表现的一种免疫耐受，而正常的妊娠免疫耐受涉及诸多因素的相互影响和相互制约，其中任何一个环节出现障碍，都有可能导致妊娠的失败．封闭抗体也称为封闭因子，封闭因子理论是基于母胎之间同种免疫反应理论发展而来的。通过结合滋养细胞表面的抗原成分，使得母体免疫系统不能识别该抗原成分，从而不能引发对胎儿成分有害的免疫排斥反应，有利于正常妊娠的进行。妊娠妇女血清中存在的封闭抗体有以下几种:非特异性封闭抗体、特异性细胞毒抗体、特异性非细胞毒抗体、抗独特型抗体。

　　滋养层细胞淋巴交叉抗原(TLX)是在正常妊娠中由滋养层细胞表达的重要抗原，由 TLX 抗原刺激母体产生的抗体即为一种封闭抗体。该抗体在母胎界面与滋养层细胞结合，封闭母体杀伤性 T 淋巴细胞对胚胎抗原的免疫攻击。它参与了母体对胚胎抗原的免疫耐受。反复自然流产的患者，由于夫妇间 HLA 抗原组织相容性增大，TLX 的一致性造成 BA的缺乏，可导致流产。应用夫妇单向混合淋巴细胞封闭抑制试验评价反复自然流产患者 TLX 抗独特型抗体，结果表明，反复自然流产妇女的抗独特型抗体水平明显低于正常妊娠妇女采用抽取复发性流产患者丈夫外周血提取淋巴细胞，对患者的前臂进行皮下注射的主动免疫治疗的方法，实践证明安全，有效，适合临床大面积推广。

　　参 考 文 献
　　
　　［1］乐杰主编． 妇产科学［M］． 第 7 版，人民卫生出版社，2008．
　　［2］Souza S S，Ferriani R A，Santos C M，et al． Immunological evaluationof patients with recurrent abortion［J］． J Reprod Immunol，2002，56∶111 － 121．
　　［3］林其德． 原因不明复发性流产的基础与临床研究进展［J］． 中华妇产科杂志，2003，38(8)∶ 481 ～483．
　　［4］林其德，汪希鹏． 原因不明复发性流产的病因病理生理机制与治疗研究进展［J］． 中国实用妇科与产科杂志，2007，23(1)∶5 ～7．
　　［5］张宏秀，闻良珍． 反复自然流产与母胎免疫调节［J］． 中国优生与遗传杂志，2004，12(2)∶ 125 ～126.