香菇多糖(Lentinan LNT)是一种β-1,3-葡聚糖,系从担子菌纲伞菌科真菌香菇子实体中提取分离纯化获得的均一组分的多糖。具有抗肿瘤、抗感染和调节免疫力等作用。传统香菇多糖的提取方法有水提醇沉法、稀碱浸提法、稀酸浸提法和酶法等,随着对香菇研究的不断深入,又出现超滤法、超声波法以及微波辅助浸提法等。其中微波辅助浸提法具有设备简单、快速、高效、安全等特点。利用微波强化固液浸取过程是颇具发展潜力的一种新型辅助提取技术。
本实验利用微波法提取香菇多糖,考察时间对多糖得率的影响,在此基础上用微波法提取伊菇820及香菇808单孢菌株粗多糖,并测量菌丝体干重,加以比较。
1 材料与方法
1.1 菌种及培养基
伊菇820,香菇808单孢菌株是由伊春林业科学院小兴安岭原生态食用菌研究所自主选育。其中伊菇820是香菇236、香菇808孢子杂交而产生的菌株。
培养基选用CYM培养基:葡萄糖20.0g,蛋白胨2.0g,酵母膏2.0g,MgSO40.5g,K2HPO41.0g,KH2PO40.46g,水1 000mL,pH自然。
1.2 仪器与设备
AL104精密电子天平,梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司;Galanz WD800B型微波炉,佛山市顺德区格兰仕微波炉电器有限公司;KZ-2111KB立式振荡培养箱,金坛市盛蓝仪器制造有限公司;BAO-23A干燥箱,施都凯仪器(上海)有限公司;MBR-304OR冰箱,三洋电机株式公社;SW-CT-1D超净工作台,江苏苏洁净化设备有限公司;TDL-5M台式低率冷冻离心机,湖南凯达科学仪器有限公司。
1.3 研究方法
1.3.1 伊菇820培养条件。在装液量为500mL的三角瓶中装200mL的培养液,共制备16瓶。高压灭菌后,凉至常温,接种伊菇820,每瓶10个接种点。置于摇床震荡培养(26℃、160r/min)。培养7d左右至长满瓶。
1.3.2 菌丝生长量测定方法。经1.3.1方法培养后,4 000r/min、5min离心获得菌丝体,于70℃恒温烘干至恒重后称量。
1.3.3 多糖提取步聚。称取一定质量的干菌丝,按1∶30的料液比加入蒸馏水并搅拌,然后设定时间、800W微波处理提取香菇多糖。收集滤液,添加乙醇使其终浓度为75%,-4℃醇沉12h后离心(4 000r/min、10min)。取沉淀,70℃烘干即得粗多糖。
1.3.4 微波提取时间梯度实验。称取6份干重为2.0g的菌丝体,分别设定微波提取时间为3、5、7、9、11、13min,然后按1.3.3方法提取多糖,计算多糖得率,确定微波最佳提取时间。
1.3.5 伊菇820及香菇808单孢菌株多糖产量比较。制备4组200mL/瓶的CYM培养基,每组3瓶。灭菌两组接种伊菇820,2组接种香菇808单孢菌株。每 瓶10个 接 种 点。 置 于 摇 床 震 荡 培 养(26℃、160r/min)。培养7天左右到长满瓶即可。
按1.3.2方法制备干菌丝并测定菌丝生长量。按1.3.3方法提取多糖,微波提取时间采用1.3.4微波提取时间梯度实验中最佳提取时间。
2 结果与分析
2.1 微波提取时间最佳时间的确定从图1结果可知,微波提取时间对菌丝体粗多糖的得率有较大影响,且在9min时有最大值,表明9min为微波提取粗多糖的最佳时间。【1】
2.2 伊菇820及香菇808单孢菌株菌丝生长量及多糖产量.【2】
由表2、表3及图2可知,香菇808单孢菌株菌丝生长量及多糖产量均明显优于伊菇820。【3】
3 结论
微波法提取菌丝体粗多糖的最佳提取时间为9min。香菇808单孢菌株菌丝生长量及多糖产量均明显优于伊菇820,且粗多糖得率高达9.52%。表明香菇808单孢菌株多糖含量较高,具有进一步的研究价值。
参 考 文 献
[1] 刘宁,李健.香菇多糖的提取工艺比较[J].食品科学,2007,28(9):199-201.
[2] 申进文,王淑敏,戚元成,等.香菇939菌株单核菌丝和双核菌丝多糖产量比较[J].园艺学报,2007,34(4):941-946.
[3] 姜慧燕,林茂,邵平.微波辅助提取香菇菌糠多糖的工艺研究[J].安徽农学通报,2010,16(24):34-36.
