川芎茶调散在湿疹治疗中的作用

　　急性湿疹一般是由多种内外因素引起的一种常见的、具有明显渗出倾向的皮肤炎症反应，临床一般以丘疱疹为主。在中医学里有“湿疮”、“绣球疮”、“浸淫疮”之称，且好发于颜面、手足、前臂、小腿、外阴等处，弥散成片，边缘不清，瘙痒剧烈，抓骚、摩擦等物理刺激可造成渗出结痂及片状糜烂。急性者以湿热为主，中医辨证多为湿热浸淫证，由此可知，清热、祛风、祛湿是急性湿疹治疗的三大原则。目前，该病的治疗多采用西医抗过敏疗法，但其存在一定的不良反应。近年来发现，利用中医传统验方治疗急性湿疹有独特的临床价值。

　　川芎茶调散是治疗头痛的常用方剂，在现代临床中具有解热镇痛抗炎的作用，对治疗荨麻疹、风湿性关节炎、过敏性鼻炎等过敏性疾病亦有一定疗效，但其在治疗急性湿疹方面研究尚为数不多。通过对该方药理及配伍关系进行研究，初步推断其可用于治疗湿疹。本研究通过设计急性湿疹动物模型，测定细胞因子的改变，初步探讨了川芎茶调散在湿疹治疗中的作用。

　　课题组前期已经对该药物的其他免疫指标做了初步研究，证实了川芎茶调散能降低小鼠耳肿胀度，提高胸腺、脾指数，升高降钙素基因相关肽（CGRP）浓度，在此基础上，课题组进一步深入研究了 IL-2、IgE 及 NO 等相关分子的水平及其作用机制。

　　1、 材料和方法

　　1.1 动物：本校教学实验中心提供的健康成年（13 周龄）昆明系小鼠75 只，体重 25～30g。

　　1.2 试剂：硫化钠；2，4-二硝基氟苯（浓度、配制方法同文献）；IL-2试剂盒；IgE 试剂及抗体；水合氯醛；甲醛；Griess 试剂，按参考文献自行配制；小鼠 IL-2 检测试剂盒和 IgE 检测试剂盒，购自上海晨易生物科技有限公司。

　　1.3 药品：川芎茶调散由薄荷叶 12g、川芎 9g、荆芥 9g、细辛 3g、防风4.5g、白芷 6g、羌活 6g、炙甘草 6g、茶叶 15g 组成，购自漱玉平民大药房。实验前用蒸馏水按照 3∶2∶1 的比例将其配成高、中、低三种浓度（其中，高浓度组：0.5g/ml，中浓度组：0.25g/ml，低浓度组：0.125g/ml），37℃下超声 40min 促进溶解。

　　1.4 主要器材：多功能自动酶标分析仪；精密天平；医用超声波清洗器；低速离心机；37℃电热恒温鼓风干燥箱等。

　　2、 实验步骤

　　2.1 动物分组：将 75 只小鼠随机分为 5 组，每组 15 只，即空白组、模型组、川芎茶调散高浓度组、川芎茶调散中浓度组和川芎茶调散低浓度组。

　　2.2 模型制备：参照文献方法，将上述五组实验小鼠除空白组外腹腔注射麻醉，腹部脱毛后，实验当天以 0.5%二硝基氯苯溶液涂于小鼠的腹部致敏，同时，左耳涂等量丙酮做基质对照。d2 强化一次，6d后在小鼠右耳内侧外涂0.2%二硝基氯苯激发，24h后处死小鼠。

　　2.3 治疗给药：观察造模成功后当天，除空白组和模型组以外，其他各组在致敏后 2h 开始用药，持续用药 7d，1 次/d。

　　2.4 检测指标：小鼠用药结束后，检测其血清 IL-2、IgE 和 NO 浓度。

　　2.4.1 血清 IL-2 的测定：按照文献。

　　进行。小鼠经眼球摘除取血 lml，1500r/min 离心 20min，取出血清置于微量离心管内，-80℃冰箱保存备用，采用 ELISA 法测定血清 IL-2，步骤按 IL-2 试剂盒说明进行。

　　2.4.2 血清 IgE 浓度测定：参考文献。采用 ELISA 法，操作步骤严格按照试剂盒说明书进行，所有标本均在同一批次内检测完成。

　　2.4.3 血清 NO 浓度测定：以 Griess 法检测血清中 NO2-水平，以反映血清中NO含量。按文献进行操作，拟合NO反应标准曲线，计算结果。

　　2.5 统计学方法：实验数据以（x±s）表示，采用 SPSS 17.0 统计软件进行单因素方差分析，设置检验水准 α=0.05，以 P<0.05 为差异有显著性。

　　3、 结 果

　　各组小鼠血清 IL-2、IgE 及 NO 浓度测定结果如表 1 所示。

　　由表 1 可见，造模组与空白组相比，血清 IL-2、IgE 及 NO 水平均有显著差异（P<0.05），提示造模成功。川芎茶调散各用药组小鼠血清 IL-2、IgE 及 NO 水平明显降低，且与模型组相比有显著性差异（P<0.05），证明应用川穹茶调散进行治疗有较好效果。

　　4、 讨 论

　　在现代临床中，川芎茶调散主要用于治疗感冒头痛、偏头痛、血管神经性头痛、慢性鼻炎头痛等，而极少应用于湿疹的治疗。现代医学研究发现，方中成分有抗炎、抗过敏、止痛消肿等作用，对外感风邪所致的过敏性疾病亦有独特的作用。

　　川芎茶调散对急性湿疹的作用机制可能是通过调节细胞因子来实现的，其调节机制复杂。急性湿疹是由内外激发因子引起的一种迟发型超敏反应，类似于变应性接触性皮炎。变应性接触性皮炎是 T 细胞介导的迟发型超敏反应。研究表明，Th1/Th2 失衡是超敏反应性疾病发病中的一个重要环节或始动因素。IL-2 是 Thl 细胞及 NK 细胞分泌的重要细胞因子，有多方面免疫活性，可促进单核巨噬细胞和 NK 细胞的增生，在抗感染、抗肿瘤等细胞免疫中发挥着重要作用。但另一方面，在变应性接触性皮炎中，IL-2 也会异常升高，导致炎症加重。如用药后 IL-2 水平降低，则证明该药物可有效抑制急性湿疹发病后 IL-2 的异常增高，减轻超敏反应。IgE 是介导Ⅰ型超敏反应的主要介质，在急性湿疹中亦为重要作用物质之一。该抗体水平降低，可表明机体内 IgE 介导的超敏反应减弱。

　　相关研究认为，NO 在免疫应答中具有多种作用，一方面，NO是各种的生理功能和防御机制的重要参与分子；另一方面，NO 产生过多可造成多种机体损害。在炎症反应中，NO 的含量往往有异常升高，故此调节其水平可有效影响炎症反应。在本实验中，用药后血清 NO 含量明显降低，显示炎症反应有所减弱。

　　本实验应用 DNFB 诱导小鼠急性湿疹模型，用药后测定血清IL-2、IgE 和 NO 水平，通过检测相关细胞因子和分子水平变化检测其免疫功能。实验结果显示，用药后小鼠血清 IL-2、IgE 和 NO 水平均下降，与正常组相比，有显著差异。可见，该药物具有一定的抗炎、抗超敏反应、参与免疫调节的作用，有望进一步开发作为临床治疗急性湿疹的有效药物。

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