瘦肉精是一类人工合成的 β - 受体激动剂,因其可以提高瘦肉率和促进动物生长,而被一些畜牧养殖户和养殖企业作为养殖促进剂使用[1].根据其结构差异可分为克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇。人食用了饲喂瘦肉精的禽畜产品后,会引起食物中毒[2,3],我国农业部公告第 235 号规定严禁在畜牧生产中使用各种 β - 受体激动剂类药物。目前,市售瘦肉精三联快速检测卡大多可同时测定猪尿中的克伦特罗( 检测限为 3. 0 μg/L ) 、莱克多巴胺( 检测限为 5. 0 μg/L ) 和沙丁胺醇( 检测限为10. 0 μg / L ) .本试验对市售 6 个不同厂家生产的瘦肉精三联快速检测卡进行质量检测,以为评价和控制快速检测卡质量提供依据[4,5].
1 材料与方法
1. 1 仪器与试药
1. 1. 1 仪器 天平: 感量 0. 01 g; 分析天平: 感量0. 00001 g; 超高效液相 - 串联质谱仪: Waters Xe-vo TQ - S; 0. 22 μm 滤膜。
1. 1. 2 试药 盐酸克伦特罗( 批号: 20223,含量:98. 5% ) 、盐酸莱克多巴胺 ( 批号: 10630,含量:97. 0% ) 、沙丁胺醇( 批号: 20618,含量: 99. 0% ) ,均购自德国 Dr. Ehrenstorfer 公司; 克伦特罗 - D9( 批号: 222042,含量: 99. 0%) ,购自德国 Witega公司; 莱克多巴胺 - D3 ( 批号: G285P22,含量:99. 1% ) 、沙丁胺醇 - D3 ( 批号: E314P35,含量:99. 0% ) ,均购自加拿大 CDN 公司; 甲酸、甲醇均为色谱纯。
1. 2 试验方法
1. 2. 1 色谱条件 色谱柱: ACQUITY UPLC?BEH C18( 100 mm ×2. 1 mm,1. 7 μm) ; 流动相: 甲醇∶ 0. 2% 甲酸溶液 = 50∶ 50; 流速: 0. 2 mL/min;进样量: 5 μL; 柱温: 40℃。
1. 2. 2 质谱条件 电喷雾离子源; 正离子扫描( ESI+) ; 多 反 应 监 测 ( MRM) ; 离 子 源 温 度150℃ ; 脱溶剂温度 500℃ ; 脱溶剂氮气流速 1 000L / h; 毛细管电压 3 kV.测试药物定性、定量离子对及对应的锥孔电压和碰撞能量见表 1.
1. 2. 3 样品制备
① 阴性样品的制备。取本实验室仪器方法确证为克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇阴性的猪尿,于 5 000 r/min 离心 5 min,取上清液,备用。
② 标准储备液的制备。分别精密称取盐酸克伦特罗、盐酸莱克多巴胺和沙丁胺醇对照品 10mg,加甲醇定容至 10 mL,配制成浓度各约为 1mg / mL 的标准储备液。【1】
③ 混合对照品工作液的制备。分别吸取适量标准储备液,用 0. 2% 甲酸水溶液稀释成浓度为 1 μg/mL 的对照品工作液。
④ 阳性添加样品的制备。分别准确吸取 100ng / mL 的克伦特罗工作液 20、30、50 μL 于 980、970、950 μL 的空白猪尿中,配置成浓度为 2. 0、3. 0、5. 0 μg / L 的盐酸克伦特罗阳性添加样品; 分别准确吸取 100 ng/mL 的莱克多巴胺工作液 30、50、70 μL 于 970、950、930 μL 的空白猪尿中,配置成浓度为 3. 0、5. 0、7. 0 μg/L 的莱克多巴胺阳性添加样品; 分别准确吸取 100 ng/mL 的沙丁胺醇工作液 70、100、120 μL 于 930、900、880 μL 的空白猪尿中,配置成浓度为 7. 0、10. 0、12. 0 μg/L的沙丁胺醇阳性添加样品。每种药物每个浓度配制 20 个样品。
1. 2. 4 样品前处理 取澄清尿样待检,如尿样浑浊,可在室温 4 000 r/min 条件下离心 5 min 处理后,取上清待检。