黄曲霉毒素（ AF） ,是由黄曲霉和寄生曲霉等多种真菌产生的次级代谢产物。这 2 种霉菌仅需一点碳源和氮源就能生长、繁殖及产毒，低温潮湿情况下极易在玉米、花生、棉籽及饼粕等饲料原料中生长产生 AF（ 刘媛婷，2011; 张自强等，2009） .AF为特剧毒性物质，常见的有 AFB1、AFB2、AFG1及AFG2等，其中 AFB1的毒性最强（ 李淑花等，2009） ,为砒霜的 68 倍之多，是公认的毒性较强的一类生物毒素，试验用的 AF 标品均为 AFB1.全世界每年有大量的粮食和谷物被黄曲霉污染（ 韩秀山等，2008） ,饲喂 AF 污染的谷物或饲料，会引起动物中毒，造成肝、肾、脾、口腔、胃肠道、大脑和神经系统损伤，导致日增质量下降、饲料转化率降低、对疾病的易感性增高及病死率增加等 （ 李娟娟，2009） .国家标准规定饲料中 AFB1的含量不得超过50 μg / L,原料污染或饲料运输和保存过程中方法的不当极易使 AF 含量超标，所以 AF 的去毒工作日益得到关注。目前主要的脱毒方式有物理脱毒、化学脱毒、酶解和吸附剂法（ 张建梅等，2009） ; 其中吸附剂法是目前饲料工业中最为普遍的一种霉菌毒素脱毒方式，具有性质稳定、不易变质、价格较低且可以大规模操作的优点（ 刘国栋，2013） .影响吸附剂吸附能力的条件主要有 pH、温度和体系毒素质量浓度等，试验以 2 种比较常见的矿土毒素吸附剂为材料，研究在不同 pH（ 模拟胃液和肠液的 pH,分别为 3 和 7） 、不同吸附剂添加量、毒素质量浓度和营养物质添加与否这 3 种条件下，吸附剂吸附AF 能力的大小，为毒素吸附剂在饲料中的应用提供数据支撑。
1 材料与方法
1.1 试验材料与仪器
1.1.1 试验材料
蒙脱石，浙江产的一种硅铝酸盐型矿土，吸附型产品； 凹凸棒土，江苏淮安产的一种含水富镁硅酸盐粘土矿土，吸附型产品； AF 标品（ AFB1,北京华安麦特） ; 一级蒸馏水； 色谱级甲醇。
1.1.2 仪器
高效液相色谱仪（ 安捷伦 1206） ,离心机，水浴恒温振荡器，超声波清洗机。
1.2 试验方法
1.2.1 pH 对 2 种矿土吸附 AF 的影响
配制所需的标准溶液： 配制 10 mg/L AFB1的标准溶液，pH = 3 的 KH2（ PO4） 缓冲液，pH = 7 的K2H（ PO4） 缓冲液。配制吸附剂悬浮液： 称取待评估的吸附剂样品0. 020 00 g 于 50 mL 的离心管中，分别加入不同量的缓冲液和AFB1标准溶液，分别制得pH =3 和pH =7质量浓度为 100 μg/L 和 4 mg/L 的 AFB1混合溶液。
孵育： 将对照组、pH =3 质量浓度为 100 μg/L和4 mg/L 及 pH =7 质量浓度为100 μg/L 和4 mg/L的 AFB1混合溶液充分混匀后放入 37 ℃恒温振荡器，120 r / min 孵育 60 min.
吸附率测定： 摇匀离心管内的吸附液，吸取1 mL溶液至 1. 5 mL 的离心管中，5 000 r / min 离心10 min.吸取 0. 5 mL 上清液于新的离心管中，再加入 0. 5 mL 的甲醇，盖上盖子，混匀液体，用有机滤膜过滤至进样瓶中，上机检测。色谱条件为 C18色谱柱，250 × 4. 65 !m; 流动相为甲醇∶水（ 80∶20） ;柱温25 ℃； 流速0.6 mL/min; 波长365 nm; VWD 检测器； 进样量 15 μL.所有样品均做 2 个重复。
吸附率计算方法： 吸附率/% =1 - C0/ C1.C0为吸附后上清液 AF HPLC 测试峰面积； C1为对照组 AF 标准溶液 HPLC 测试峰面积。
1.2.2 吸附剂添加量和毒素质量浓度对吸附剂吸附AF 的影响
配制所需的标准溶液： 配制 10 mg/L AFB1的标准溶液。配制吸附剂悬浮液： 分别称取待评估的吸附剂样品 0.020 00、0.050 00 和0.100 00 g 于50 mL 的离心管中，分别加入一定量的蒸馏水和 AFB1毒素标准溶液制得 0. 020 00、0. 050 00 和 0. 100 00 g 这3 种添加量的 100 μg / L,4、8 和 10 mg / L 的毒素混合溶液。孵育及检测方法同 1. 2. 1.
1.2.3 营养物质的添加对 2 种吸附剂吸附 AF 的影响
配制所需的标准溶液： 配制 10 mg/L AFB1的标准溶液，260 mg/L 维生素 B1的标准溶液，60 mg/L维生素 B2的标准溶液。配制吸附剂悬浮液： 称取待评估的吸附剂样品 0. 020 00 g 左右于 50 mL 的离心管中，试验组添加 0. 135 g 的赖氨酸，再分别加入不同量的 AFB1标准溶液及蒸馏水、维生素 B1和维生素 B2溶液，维生素 B1、维生素 B2、赖氨酸及 AFB1的最终含量： 10 mg/L、20 mg/L、1.35%和100 μg/L,对照组以蒸馏水作对照。加入营养物质的试验组和对照组按照 1. 2. 1 孵育及检测的方法进行。
1.3 数据处理
用 Excel 2010 进行数据处理与分析。
2 结果与分析
2.1 不同 pH 条件下 2 种矿土对 AF 的吸附
从表 1 可见： 在反应体系为 50 μg/L 毒素质量浓度下，凹凸棒土和蒙脱石的吸附率接近 100%,没有差异。AFB1质量浓度为 2 mg/L 时，凹凸棒土和蒙脱石的吸附率变化规律一致，在 pH 为 3 时最高，pH 为 7 时次之，蒸馏水最低，这和之前的研究结果一致（ 刘媛婷，2011） .【1】
2.2 不同吸附剂添加量和 AF 质量浓度下 2 种矿土对 AF 的吸附
从表2 可见： AFB1质量浓度为0.050 ~5.000 mg/L时，相同毒素质量浓度条件下，矿土的添加量越大，毒素吸附率越高； 在相同添加量的情况下，随毒素质量浓度升高，蒙脱石和凹凸棒土对 AFB1的吸附率逐渐降低，吸附率减少的幅度逐渐增大。
AFB10. 05 μg / L 时，蒙脱石和凹凸棒土的吸附率都为 100%.高质量浓度条件（ 2 ~5 mg/L） 下，同吸附剂添加量和毒素质量浓度条件下，该蒙脱石类产品吸附率大于凹凸棒土类产品。【2】
2.3 添加营养物质后 2 种矿土对 AF 吸附
从表 3 可见： 在维生素 B1、维生素 B2和赖氨酸的添加条件下，2 种矿土吸附 AF 吸附率与对照组数据没有差异，这说明营养物质的添加对矿土吸附 AF 的能力没有影响。【3】
3 讨论
3.1 pH 对 2 种矿土吸附 AF 的影响
AFB1的等电点为 4. 17,毒素溶液 pH < 4. 17时，AFB1带正电荷，pH > 4. 17 时，AFB1带负电荷。从静电吸附单方面考虑，溶液 3 < pH <4. 5 时，AFB1带正电荷，蒙脱石和凹凸棒土类产品表面带负电荷（ 王爱勤等，2011; 于炎湖等，2004） ,有利于蒙脱石和凹凸棒土类吸附产品的对 AFB1的表面吸附，pH > 4. 17 时，AFB1带负电荷，不利于 AFB1的表面吸附，且由于蒙脱石和凹凸棒土对 AF 的吸附主要为化学吸附（ 李静静等，2013） ,所以毒素含量低时（ 试验的 50 μg/L） ,pH 不影响这 2 种吸附剂对AFB1的吸附能力，这和之前的研究报道一致（ 于炎湖等，2004） .
3.2 吸附剂添加量和毒素质量浓度对 2 种矿土吸附AF 的影响
相同 AFB1质量浓度条件下，矿土吸附剂的添加量越大，吸附率越高，这与齐德生（ 2004） ; 唐家（ 2010） 研究结果一致。吸附率减少的幅度随毒素质量浓度的增加逐渐增大，这是高质量浓度条件毒素含量增加的原因。在高质量浓度毒素条件下吸附剂添加量等幅增加，该蒙脱石产品大于凹凸棒土产品吸附率的增加量。高质量浓度相同毒素含量条件下该蒙脱石对 AF 的吸附率大于凹凸棒土。由于不同厂家吸附剂产品的来源和结构不同，所以不代表所有的蒙脱石产品对 AF 的吸附效果都大于凹凸棒土。
根据饲料中 AFB1的量来确定吸附剂对 AFB1的吸附率，从而明确吸附剂在饲料中的适宜添加量比较困难（ 齐德生，2004） ,试验探讨的 2 种吸附剂对AFB1的吸附率与反应体系中 AFBI初始质量浓度间的关系，与吸附剂在动物体内的吸附情况有虽有些差异，但仍然可作为初步筛选毒素吸附剂的方法。
3.3 营养物质的添加对 2 种矿土吸附 AF 的影响
矿土吸附剂类产品对毒素的吸附一般为化学吸附，没有选择性，所以吸附毒素的同时对营养物质也有明显的吸附作用（ 唐家，2010） ,试验以饲料中比较重要的、常见的营养成分维生素 B1、维生素B2和赖氨酸为代表，测试这些营养物质的存在对吸附剂吸附 AFB1有无影响。试验结果表明： 对照组和试验组的吸附率相近，这和齐德生等（ 2004） 添加赖氨酸含量 0. 2% 和 0. 4% 对毒素的吸附没有影响结论一致，这说明反应体系中，营养物质的添加对2 种吸附剂吸附 AFB1的能力没有明显影响。关于吸附剂产品对营养物质的吸收，有研究 涂华荣等（ 2003） 认为吸附剂会吸附饲料中的氨基酸和维生素等营养成分，所以会造成饲料中这些营养物质的损失，也有人认为吸附剂对营养物质的吸收会延长它们在动物肠胃中的停留时间，有利于机体对氨基酸和维生素的充分吸收，提高营养物质的利用率，所以还需要进一步的研究和确认。
4 小结
吸附体系中 AFB1质量浓度较低（ 50 μg/L） 时，蒙脱石和凹凸棒土类产品对 AF 的吸附不受 pH 影响； AFB1质量浓度较高时，矿土类吸附剂在 pH 为3 时吸附率最大，pH 为 7 时次之，蒸馏水最低。在吸附体系的同 AFB1质量浓度下，吸附剂添加量越大，吸附率越高，吸附率增加的幅度随毒素质量浓度的增加逐渐增大； 添加量不变的条件下，AFB1质量浓度越高，吸附率越低； AFB1质量浓度较高时，同添加量和毒素质量浓度条件下该蒙脱石产品对AFB1的吸附率大于该凹凸棒土产品。饲料中维生素和氨基酸等营养物质的添加对蒙脱石和凹凸棒土吸附 AFB1的能力没有显着影响。
参考文献
[1]刘媛婷。 霉菌毒素吸附剂对黄曲霉毒素 B1吸附特性及效果研究[D]. 雅安： 四川农业大学，2011.
[2]张自强，柏凡，张克英，等。 我国饲料中黄曲霉毒素B1 污染的分布规律研究[J]. 中国畜牧杂志，2009（12） :27 -30.
[3]李淑花，都业良，张凤，等。 饲料中黄曲霉毒素去除方法的研究概况[J]. 天津农业科学，2009（5）： 23 -25.
[4]韩秀山，许家亮，陈法荣，等。 霉菌毒素的危害及蒙脱石的脱霉应用[J]. 山东畜牧兽医，2008（12） : 50 -51.
