细胞培养中的微生物污染及防控对策(2)

　　4 病毒污染
　　
　　病毒污染特点是极为隐蔽，很难用常规的方法检测到[21].受病毒污染的细胞液通常清亮无变化。污染分为外源性和内源性[19,22],污染的主要来源为细胞系，常见于杂交瘤细胞[4].大多数受病毒污染的细胞不会产生形态变化及细胞病理现象[19],少部分病毒会造成细胞变圆、肿胀，脱落[21].
　　
　　疑病毒污染后，可用血细胞吸附试验、免疫荧光抗体法及电子显微镜法有效检出病毒[19].通常病毒物污染的清除是十分困难的，可以重新引入高质量的细胞株。
　　
　　5 黑胶虫污染
　　
　　黑蛟虫是一种生物还是非生物，学术界还有争论。其污染特点为开始对细胞无影响，当数量达到一定程度时就会对细胞产生影响[23].受黑蛟虫污染的细胞液通常清亮无变化。污染主要来源于血清，400倍显微镜下可见点状或片状游动小体。
　　
　　黑蛟虫早期污染一般采用如下方法： 用0. 25%的胰酶消化，当有少量细胞变圆或脱壁时，用血清终止消化，轻轻用培养基或D-Hanks液清洗3遍（ 缓慢流过细胞表面） ,不要吹打，然后吹散细胞，换培养瓶培养，隔天换液。2 d后重复一次，以后每24 ~ 36 h换1次液，1周后，黑点可基本消失。也可用麦诺霉素10 mg /L处理，连续1周，但麦诺霉素对细胞有毒性[23].
　　
　　6 细胞的交叉污染
　　
　　细胞的交叉污染一般来自细胞建株和细胞传代过程中两种或两种以上细胞之间的污染[19].镜下可发现细胞的形态发生改变，与正常该细胞株的形态不同。
　　
　　关于细胞系的种系来源可以通过各种免疫学试验、同功酶分析及细胞遗传学方法来确定。其中以荧光抗体染色法和同功酶谱系分析法应用较广泛。同功酶分析法不仅可以鉴别细胞种属，而且可以鉴别种内细胞的交叉污染[19].若发生细胞的交叉污染，通常不能挽回，只能放弃细胞。为避免细胞的交叉污染，在进行多种细胞培养操作时，所用器具要严格区分，最好做上标记便于辨别。并按顺序进行操作，避免一起进行时发生混乱。在进行换液或传代操作时，注射器和滴管不要触及细胞培养瓶瓶口，以免把细胞带到培养液中污染其他细胞[23].
　　
　　7 结 语
　　
　　细胞一旦发生污染，任何一种挽救细胞的处理可能都会对细胞产生不良或未知的影响，因此如果不是不易获得的细胞，实验者都应该抱着严谨平和的态度重新开始。细胞培养中污染的来源主要有以下几种途径：1） 细胞组织本身带有污染；2） 实验室内空气不洁净；3） 实验操作者未能严格遵守操作规程；4） 生物安全柜不洁净或使用不正确；5） 实验中所用的器具和培养基消毒不彻底。因此实验者应从以上几方面尽量避免细胞污染，才能保证实验的有序进行。
　　
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