汗液（汗潜指纹）中的钙离子含量大约为 20 mg/L,在已有的指纹显现技术中，曾经利用 8-羟基喹啉铝、邻氨基苯甲酸与指纹中金属离子络合后的颜色变化显现指纹[1,2].目前该方法基本上没有人用，其主要原因可能是其显现效果不如“502”、DFO（1,8-二氮芴-9-酮）、IND（1,2-茚（满）二酮）、硝酸银、茚三酮等方法。
我们注意到，近几十年来已研发出很多新的钙离子络合指示剂[3~8],包括常用于比色法测量微量钙的偶氮氯膦Ⅲ、乙二醛缩双（邻氨基酚）（GBHA）、钙（羧酸）指示剂（3-羟基-4-（2-羟基-4-磺基-1-萘基偶氮）萘-2-羧酸）。这三种钙离子络合指示剂，可以在室温下与钙离子快速反应，发生非常明显的颜色变化，从而很灵敏地检测各种样品中的钙离子。但是还没有见到将其试用于指纹显现的报道，因此我们进行了这方面的尝试。
初步实验结果表明：偶氮氯膦Ⅲ、乙二醛缩双（邻氨基酚）（GBHA）可以用于指纹显现。
1 实验部分
1.1 实验材料
所有试剂均为分析纯，上海试一化学试剂有限公司生产；试验用纸主要为尖兵A4纸。
人工指纹：以 1000 mL 人工指纹为例，含有氯化钠，4.047 g,相当于钠 1.591 g;氯化钾，0.458 g,相当于钾 0.240 g;氯化钙，0.056 g,相当于钙 0.020 g;总氯为 2.710 g;甘氨酸、丙氨酸、L-赖氨酸、苏氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸、丝氨酸、色氨酸等 10 种氨基各 0.004 g.称取上述固体混合物 0.460g,用蒸馏水溶解并且定容到 100 mL,记为人工汗液基本浓度 Co茚三酮溶液：称取 3 g 茚三酮，溶解在 50 mL 丙酮中，再加入 50mL 石油醚。
偶氮氯膦Ⅲ溶液的典型配制方法：称取0.0110 g醋酸钠固体于50 mL容量瓶中，加入0.286 mL冰醋酸溶液，用乙醇定容至刻度，制成pH约为4的缓冲溶液；称取0.1005 g偶氮氯膦Ⅲ固体于新的50mL容量瓶中加1 mL蒸馏水溶解，再用缓冲溶液稀释至刻度。
GBHA溶液的典型配制方法：称取0.100 g GBHA于100 mL容量瓶中，加50 mL无水乙醇溶解；临用前加入6~7 mL 0.6 mol/L的NaOH水溶液（pH≈14）。
1.2 实验仪器
FA2004电子天平，上海舜宇恒平科学仪器有限公司；佳能相机CANON.
1.3 指纹样本的制备
1.3.1 自然指纹样本的制备
在样品上用铅笔画出四个空位，分别标注为 N1、N2、O1和O2.净手，自干，塑料手套内捂汗 10 分钟后分别在两个相邻空位用手指连续按两个指纹，注意力道和方向尽量保持一致。新指纹放置 4~6 小时，旧指纹放置 3 天。其中：N1,新的第一枚；N2,新的第二枚；O1,旧的第一枚；O2,旧的第二枚。
1.3.2 人工指纹样本的制备
人工汗液基本浓度 Co;稀的为 1/5Co.用两支洗净的钢笔分别灌入 Co 浓度的人工汗液和 1/5Co 浓度的人工汗液。仿照上法制备新旧人工指纹。
1.4 实验过程及注意事项
用棉签或者毛刷将显现液均匀的涂抹在A4纸上，涂刷时最好直线涂抹，可以少许重复，但是不能太用力，不要画圈，不能有积液，晾干；自然光照，使用相机拍照时，采用微距、不闪光且对准图下标记文字。
2 实验与讨论
2.1 浓度、pH、水含量对显现效果的影响
我们在实验中发现，浓度、pH、水含量等都对指纹显现效果有明显的影响，通过实验得到了较佳的配方，其实际显现效果见图 1、图 2.
值得注意的是，有的纸张中使用碳酸钙作为填料，长时间与显现剂接触有可能使没有指纹的地方也出现颜色变化，使对比度降低，因此应该待指纹清晰时及时拍照保存。使用原图进行对比时，可以观察到：偶氮氯膦Ⅲ显现的指纹呈蓝色，而 GBHA 显现的指纹呈红色；空白处的偶氮氯膦Ⅲ溶液会出现浅蓝色，GBHA 溶液也会出现浅红色，只是比前者稍淡，即背景颜色较浅。
2.2 茚三酮的续显和剖半对比
实验中发现偶氮氯膦Ⅲ和GBHA对较淡的指纹（N2）显现效果不好，因此我们使用经典的茚三酮溶液进行了续显和剖半对比实验，见图 3、图 4.
从图 3、图 4 可以看出：偶氮氯膦Ⅲ和 GBHA 的显现效果明显不如茚三酮，幸运的是前面的显现剂对茚三酮没有明显的不利影响，因此可以考虑先使用偶氮氯膦Ⅲ或者 GBHA,快速发现或者“示踪”/“定位”指纹，然后使用茚三酮显现出更多的指纹细节。
2.3 偶氮氯膦Ⅲ和 GBHA 指纹显现剂的某些特性
为了找到偶氮氯膦Ⅲ和 GBHA 在指纹显现方面的特殊用途，我们在各种材料上制备自然指纹 N1、N2,进行扩展应用实验，包括：各种纸制品（其它品牌的 A4 纸、纸箱、作业本、报纸、广告单等）、皮革、木头、陶瓷、镀锌铁等。
已发现了一些有趣的试验现象：GBHA 可以较好的显现出报纸、镀锌铁皮上指纹，茚三酮不能用于后者；偶氮氯膦Ⅲ可以显现出陶瓷上的指纹纹路以及软皮上的指纹轮廓，茚三酮也不能用于这两种材料（图略）。
另外，将偶氮氯膦Ⅲ和 GBHA 用于区分新旧指纹的探索试验结果表明，偶氮氯膦Ⅲ基本上不能显现已自然放置三天的旧指纹。
我们计划将来对此进行深入研究，也许能找到区分新旧指纹的一种新方法。
3 小结
虽然很多钙离子检测方法很灵敏，但是将其试用于指纹显现时，应该注意到肉眼（以及照相机）与分光光度计、荧光光谱仪等仪器的差异。肉眼观察指纹或者照相机拍摄，需要足够的对比度，加上样品本身组成复杂，因此在指纹显现时，原方法的灵敏度或者检出限只具有一定的参考价值，必须进行实验确定该方法能否用于指纹显现；也许可以考虑试制配套的仪器，替代肉眼及照相机，观察并且呈现指纹。
在纸上，偶氮氯膦Ⅲ和 GBHA 的显现效果明显不如茚三酮，最好的方法可能是先使用偶氮氯膦Ⅲ或者 GBHA,快速找到指纹，然后使用茚三酮、DFO 或者 IND 进行续显（后续显现、增强）。另外，发现并且利用新的指纹显现剂的特殊用途，应该成为此类研究的重点。【图略】
参考文献
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