氯胺酮（ ketamine）俗称“K粉”,镇痛药类，由美国药剂师Stevens于1962年首次成功合成，后被用于战争创伤外科手术麻醉药及临床手术麻醉剂或麻醉诱导剂 ;因其具有致幻作用，在世界范围内被广为滥用。在我国，氯胺酮的滥用日趋严重，尤其在一些歌舞厅等娱乐场所较多见，使用群体以青少年为主，滥用方式主要经鼻、口吸食，通常与海洛因、大麻等毒品合并使用。用鼻吸食氯胺酮吸收、起效快，一般在5~10 min内起效，在鼻、口腔黏膜及大脑等高灌注组织中氯胺酮含量较高[1],人体内氯胺酮代谢半衰期为2~4 h.目前，国内外对人体血液、尿液和头发中新型毒品氯胺酮的检测方法有一定研究，通常采用GC/MS法[2-6]、LC-MS/MS法[7-13],其中以LC-MS/MS法检测为主，而对唾液中氯胺酮的检测方法文献报道仍然较少。本文采用超高效液相色谱-串联质谱法对唾液中氯胺酮的定性定量检测方法进行了研究。
1 材料与方法
1.1仪器与试剂超高效液相色谱-串联质谱仪，配Agilent 1290型超高效液相色谱仪（Analyst?software工作站）和AB SCIEX 4000Q TRAP串联质谱仪，电喷雾离子源（ESI）。
氯胺酮购自公安部物证鉴定中心 ;化学试剂乙腈、甲醇为色谱纯，甲酸、氨水为分析纯，实验用水为屈臣氏去离子水。
1.2实验样品
35份唾液样品均采自云南氯胺酮滥用者。
1.3方法
1.3.1 分析条件
色谱条件 :安捷伦C18色谱柱（2.1 mm×50 mm,1.8μm ）；流动相A为乙腈，流动相B为0.1 %氨水溶液 ;洗脱梯度 :0~1 min流动相A为1 %;1~2 min流动相A由1 %升到90 %;2~2.5 min流动相A为90 %;2.5~3.5 min流动相A由90 %降到1 %,3.5~6min流动相A为1 %.进样体积5μL;流速0.4 m L/min;运行时间6.01 min;柱温35℃。
质谱条件 :电喷雾离子源（Turbo Spray）采用正离子扫描，多反应监测（MRM），三重四极杆检测器；毛细管电压为5.5 k V;离子源温度为300℃。氯胺酮的监测离子及锥孔电压、碰撞电压等参数如表1所示。
1.3.2 样品处理
取唾液加适量甲醇并稀释至一定倍数，经振荡3min、超声10 min、离心5 min,取上清液过有机滤膜（13mm×0.22μm）后供检。
1.3.3 标准品工作溶液的配制
使用1.0 mg/m L氯胺酮标准品经稀释得到100.0、50.0、25.0、10.0、5.0、1.0 ng/m L的标准工作液，置4℃冰箱保存。
2 结果与讨论
2.1系统适应性试验
在前述检测条件下，分别对空白唾液、空白唾液添加和氯胺酮滥用者唾液样品进样分析，以238.20/207.10和238.20/125.00两个离子对、保留时间（tR=2.01 min）和已知氯胺酮标准物质比对进行定性，阴性对照无干扰 ;结果表明UPLC-MS/MS检测方法专属性好。氯胺酮的色谱图如图1所示。
2.2流动相的选择
本文分别用0.1 %甲酸的乙腈-0.1 %氨水溶液（A）、乙腈-0.1 %氨水溶液（B）、乙腈-0.1 %甲酸溶液（C）和乙腈-0.3 %甲酸溶液（D）四种流动相对空白添加溶液（25 ng/m L）进行梯度洗脱，经UPLC-MS/MS法进样分析。结果表明 :氯胺酮在碱性流动相乙腈-0.1 %氨水溶液中响应度最高。因此，本文选用乙腈-0.1 %氨水溶液作为流动相。
2.3线性范围、检出限和定量限
将氯胺酮标准品工作液添加至空白唾液中，按1.3.2方法处理成浓度分别为1.0、5.0、20.0、25.0、50.0、100.0 ng/m L系列浓度的空白添加溶液，按1.3.1条件检测；采用Multi Quant 2.1软件中Quqntitate组件，以定量离子（238.20/125.00）峰面积A为纵坐标，质量浓度C为横坐标作图，求得标准曲线的线性回归方程为A=24000C+3320,r=0.9990,氯胺酮在1~100ng/m L范围内线性关系良好。检出限（LOD）为0.06ng/m L（以信噪比S/N大于3为评价标准），定量限（LOQ）为0.21 ng/m L（以信噪比大于10为标准）。
2.4回收率、基质效应、准确度和精密度
将氯胺酮标准品工作液添加至空白唾液中，按1.3.2方法处理成浓度分别为5.0、50.0、90.0 ng/m L的空白添加溶液，平行操作6份，在1.3.1条件下对以上三种工作溶液进样分析（n=6）。计算回收率和基质效应。一日内连续测定6次，每次间隔2 h,计算日内精密度 ;连续测定6天，每天测定一次，计算日间精密度。如表3示 :唾液样品中氯胺酮的提取回收率、基质效应、准确度和日内、日间精密度分别在90 %~105 %、96 %~115 %、97 %~103 %和0~7%范围内。结果表明，该检测方法具有良好的准确度、精密度、提取回收率和较低的基质效应（见表2）。
2.5稳定性
将氯胺酮标准品工作液添加至空白唾液中，配制成一定浓度的低、中、高3种基质加标溶液，室温放置24 h及经过3次冻融循环后，按1.3.2方法处理基质加标唾液成浓度分别为5.0、50.0、90.0 ng/m L的基质加标溶液（n=6），并在1.3.1的实验条件下测定，考察其短期稳定性及解冻稳定性。结果表明，氯胺酮在上述条件下均稳定（见表3）。
2.6实际唾液检测
用UPLC-MS/MS法分别对35份氯胺酮滥用者的真实唾液样品进行检验分析，检出氯胺酮含量低于1μg/m L样品6例，含量在1μg/m L至100μg/m L之间的样品1例，含量高于100μg/m L的样品24例；未检出氯胺酮的样品4例；检出率88.6 %.结果表明：氯胺酮滥用者的唾液中，氯胺酮的检出率高，且含量比较高。分析者认为，唾液中氯胺酮含量的差异可能与氯胺酮的摄入方式、摄入量及唾液采集时间有关，尤其是吸食氯胺酮时，其唾液中氯胺酮的含量往往较高，因为唾液中的淀粉酶不能水解氯胺酮，因此能检测出氯胺酮原体。
3 结论
本文选用甲醇蛋白沉淀法处理唾液样品中的氯胺酮，具有提取回收率高、基质效应好、处理操作简便等优点，适用于唾液样品中氯胺酮的提取、分离。分别考察了碱性流动相、酸性流动相等多种流动相对氯胺酮色谱质谱行为的影响，结果表明氯胺酮在碱性流动相中色谱行为好、响应度高，故选用碱性流动相对氯胺酮进行梯度洗脱。本文建立的超高效液相色谱-串联质谱法操作简便、快速、灵敏度高，可作为吸毒检测工作中对氯胺酮检测的一种新方法。
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