氨基酸的测定有多种方法,以前我们用的较多的是比色法[1],由于比色法准确性不高,结果也易受外界因素干扰,所以现在我们很少用它来测定氨基酸的含量了。现在我们常用的是氨基酸自动分析仪法[2]和HPLC法[3].HPLC法测定准确度高,但测量成本较高,多样本测量费用太大,而且对操作人员技术要求也较高。而氨基酸自动分析仪法操作简单、准确、自动化程度和灵敏度高,便于多样本数据的测定。本文利用121MB型氨基酸自动分析仪(美国贝克曼公司)测定甘肃鼢鼠骨骼中氨基酸的含量,为进一步开发甘肃鼢鼠骨骼药用价值提供最基础的数据资料。
1 实验材料
1.1 实验动物
1岁龄以上甘肃鼢鼠10只(体重200±20g),雌雄不限,采集地点:陕西延安,采集时间:2013年10月。
2 实验方法
2.1 骨骼的制备
甘肃鼢鼠麻醉处死,半小时内剥皮剔肉,取下所有的骨骼,去离子水冲洗3~5遍,于30℃恒温箱中烘干,用粉碎机充分粉碎后再碾磨,装袋备用。
2.2 样品液配制
准确称取样品100mg于烧杯中,先加入6mol·L-1HCL充分搅拌,然后110℃水解22h,放置冷却,待测。
2.3 样品检测
待测样品依次放入121MB型氨基酸分析仪(美国贝克曼公司),测定样品中各种氨基酸含量。
2.4 数据统计
一份样品检测3次检测结果以平均值表示。
3 实验结果与讨论
3.1 甘肃鼢鼠骨骼中氨基酸含量的质量分数如表 1 所示。
由表1可知,甘肃鼢鼠骨骼中常见氨基酸含量丰富,其中药用价值较高的羟脯氨酸含量较高,这是由甘肃鼢鼠的食性决定的,甘肃鼢鼠是一种地下鼠,它主要靠挖掘采集食物,喜欢植物的根和一些埋在地下的植物,比如马铃薯、萝卜等,其次喜食含粗纤维、粗脂肪较多的落叶松、油松等林木的根部[4],其体内的羟脯氨酸可能来源于这些食物,是长期食用它们沉积在骨骼里的结果,而植物中氨基酸的含量与它生长的土壤有关[5].
4 结论
在多样本氨基酸分析方面,氨基酸自动分析仪有简单易操作的优势,准确度也较高,可以直接对氨基酸进行分析,避免了其他物质和衍生物的干扰,能快速、准确地定量氨基酸。本实验对甘肃鼢鼠全身骨骼氨基酸进行了测定,发现药用价值高的羟脯氨酸含量较高,而羟脯氨酸被认为是虎骨中药用价值最高的氨基酸[6],所以甘肃鼢鼠骨骼具有开发成新一代虎骨替代品的潜质。
参考文献:
[1]李景红,杨再山,孟祥晨。比色法检测乳中掺加的动物胶原水解蛋白。中国乳品工业[J].2007,35(9):50-52.
[2]陈雄伟,王桂芬。用835-50型氨基酸自动分析仪对羟脯氨酸的测定方法。氨基酸杂志[J].1985,4:5-6.
[3]高建华,宁正祥。禽畜皮和鱼鳞的基本成分及氨基酸组成分析。现代食品科技[J].2007,23(12):77-79.