摘 要： 研究灵芝功能性食品的遗传毒理学实验。通过Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核及小鼠精子畸形试验来进行灵芝功能性食品的遗传毒性试验研究。结果表明, 3项遗传毒性试验均为阴性。
关键词： 灵芝; 功能性食品; 小鼠; 免疫功能;
医典记载灵芝可“益心气, 益肝气, 益脾气, 益肺气, 益肾气”[1], 灵芝具有大补五脏虚损、平衡阴阳、调和气血的功效[2], 享有“诸药为各病之药, 灵芝为百病之药”之美誉。近年来亦有研究表明, 灵芝有抗疲劳、免疫调节、抗肿瘤作用, 还具备降血糖、降血脂、抗氧化等作用[3]。在灵芝有益于人体各机能作用的基础上, 灵芝功能性食品以灵芝提取物、破壁灵芝孢子粉为原料, 经现代工艺制成了具有增强免疫力作用的功能性食品, 本研究依据《食品安全性毒理学评价程序和方法》[4], 以灵芝功能性食品为实验材料对小鼠进行了遗传毒理学实验研究。
1、 材料和方法
1.1、 材料
灵芝功能性食品, 棕褐色粉末;选用体重25g~30g的Balb/c雄性小鼠 (SPF级) , 实验期间, 动物自由摄食饮水, 温度控制在20~26℃, 相对湿度控制为40%~70%。
1.2、 Ames实验
采用TA97、TA98、TA100和TA102菌株, 进行加与不加小鼠肝S9的标准平皿渗入法实验。设5个样品剂量:8、40、200、1000和5000?g/皿, 同时设自发对照、溶剂对照 (灭菌蒸馏水100?g/皿) 和阳性对照。不加S9实验的阳性对照为1.5?g/皿的叠氮化钠 (TA100) , 0.5?g/皿的丝裂霉素C (TA102) , 0.2?g/皿的2, 4, 7-三硝基-9-芴酮 (TA97、TA98) ;加S9实验的阳性对照为50?g/皿的1, 8-二羟基蒽醌 (TA102) 和10?g/皿的2-氨基芴 (TA97、TA98、TA100) 。每个实验剂量做3个平行皿, 重复实验1次。
1.3、 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验
将小鼠随机分为5组, 每组10只, 雌雄各半, 设10、5.0和2.5g/kg·bw受试物组, 另设阴性对照 (蒸馏水) 、阳性对照 (环磷酰胺40mg/kg·bw) 组。动物分别于第0小时和第24小时按2m L/100g·bw经口灌胃, 末次染毒后6h处死动物, 每只计数1000个嗜多染红细胞 (PCE) , 观察含有微核的嗜多染红细胞数, 计算微核率, 同时观察200个红细胞中PCE和成熟红细胞 (NCE) 所占数目, 并计算PCE/NCE比值。
1.4、 小鼠精子畸形试验
将小鼠分为5组, 每组5只。设阴性对照组 (蒸馏水) , 40mg/kg·bw环磷酰胺 (阳性对照组) 和10、5.0和2.5g/kg·bw 3个样品剂量组 (各组分别称取10、5.0和2.5g受试物, 各加蒸馏水至20m L混悬) , 按2m L/100g·bw经口灌胃动物, 连续5d。于首次灌胃后第35天处死动物, 取双侧附睾, 制片, 每只动物观察1000个完整精子, 记录各类畸形精子数。
1.5、 实验数据统计
各剂量组均数比较使用方差分析, 精子畸形率比较使用秩和检验, 微核率比较使用泊松分布法。
2、 结果
2.1、 Ames试验结果
自发对照组的每皿平均回变菌落数均处于正常值范围内, 而阳性对照组均为自发对照组2倍以上, 呈明显阳性反应。受试物组与溶剂对照组的平均回变菌落数均未超过自发对照组的1倍, 呈阴性反应。见表1、表2。
2.2、 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果
各实验组PCE/NCE比值与阴性对照组比较无显着性差异 (P>0.05) , 说明样品对小鼠骨髓细胞增殖无不良影响。阳性对照组动物的微核率均显着高于对照组 (P<0.05) , 样品各剂量组的微核率与阴性对照组比较均无显着性差异 (P>0.05) , 说明灵芝功能性食品在小鼠骨髓细胞微核实验中为阴性结果。见表3。
表1 样品Ames试验结果 (第1次) (?±s)
表2 样品Ames试验结果 (第2次) (?±s)
表3 样品对小鼠骨髓细胞微核发生率的影响
2.3、 小鼠精子畸形试验结果
阳性对照组的精子畸形率显着高于阴性对照组 (P<0.05) , 样品各剂量组的精子畸形率与阴性对照组比较均无显着性差异 (P>0.05) , 说明灵芝功能性食品在小鼠精子畸形试验中为阴性结果。见表4。
表4 样品对小鼠精子畸形试验结果
3、结论
在对灵芝功能性食品进行遗传毒性试验研究中, Ames试验结果为阴性, 说明样品无诱导试验菌株回复突变的作用, 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核以及小鼠精子畸形试验结果均为阴性, 各动物未见细胞毒性作用。
参考文献：
[1]魏新雨.古代对灵芝药用功效的认识[N].中国中医药报, 2002-12-04.
[2]张静, 雅曹煌, 龚苏晓, 等.中药甘味的药性表达及在临证配伍中的应用[J].中草药, 2016 (4) :533-539.
[3]卢振, 陈金和, 王雨来, 等.灵芝的研究及应用进展[J].时珍国医国药, 2003 (9) :577-581.
[4]中华人民共和国卫生部, 中国国家标准化管理委员会.GB15193.1-2003食品安全性毒理学评价程序和方法[S].2003.
