摘要：蝴蝶是节肢动物门昆虫纲鳞翅目锤角亚目动物的通称, 在蝶类的分类学研究中, 在科的鉴别尤其是近缘科间的区分上, 必须依靠翅脉变化来鉴别.但蝶类翅上附有大量鳞片且翅较为脆弱, 为了便于观察研究需要制作翅脉标本.但传统的翅脉标本制作方法中去除鳞片的过程很容易损坏蝶翅, 影响进一步的研究, 因此蝴蝶翅脉标本的制作方法亟待优化.本文介绍了一种蝴蝶翅脉标本的制作方法, 与传统方法相比具有省时省力、损坏率低且易保存等优点, 且制作的翅脉标本能够满足科学研究及教学的需求.
关键词：蝴蝶; 翅脉标本; 制作方法;
Optimized Research on Mounting Method of Wingpattern Slide of Butterflies
LIU Wen-zhen SUN Yong-ling SUN Ying-hui
Dezhou University
Abstract：
Butterflies belong to Arthropoda, Insect, Lepidoptera, Rhopalocera.Wingpattern slides is very important in the research of butterflies.Wings are easily damaged in the procedure of scale-removing of the traditional method, because of the fragile wings attached to numerous scales.Mounting method of wingpattern slides of butterflies are expected to be optimized.An optimized mounting method of wingpattern slides are introduced in the paper, with the advantages of time and labor saving, low spoilage and easy preservation, which can meet the needs of teaching and researching.
Keyword：
Butterfly; wingpattern slide; mounting method;
蝴蝶是节肢动物门昆虫纲鳞翅目锤角亚目的一类动物的统称, 在分类学研究中该目昆虫分科使用的主要特征是翅, 包括翅脉、翅连锁方式、翅形和翅面斑纹等, 其中的翅脉尤为重要, 在科的鉴别尤其是近缘科间的区分上起到重要的作用.
蝴蝶的翅由上下两层膜紧密接合而成, 有体液进入, 有气管及神经分布, 翅脉则由保留着的中空的脉纹构成.由于不同的蝴蝶种类翅上的脉纹各不相同, 所以翅脉标本成为区分蝴蝶种类的主要依据之一, 也是相关专业课程教学中的直观教材[1-2].
常用的蝴蝶翅脉标本的制片方法很多, 对于蝴蝶翅面上的鳞片处理曾有以下两种方法:曹峰用透明胶带粘去蝴蝶翅上的鳞片[3], 张贞材用浓硫酸、漂白剂加盐酸等氧化剂去除蝴蝶翅上的鳞片[4].但这两种方法都有各自的不足, 张贞材使用的浓硫酸是一种具有强腐蚀性的危险试剂, 容易对人体造成伤害;而用胶带粘去鳞片的方法虽然对人体无害, 但是在粘去鳞片的过程中蝶翅很容易受到损伤.在蝶翅翅脉玻片标本的制作过程中, 陆秀君等用二甲苯对蝶翅进行透明[5], 但二甲苯在透明过程中会使翅脉变脆且对人体有害.由于这些传统的蝴蝶翅脉制作方法中皆存在不少弊端, 但蝴蝶翅脉标本是植物保护、生物科学类课程的重要实验材料, 在农林类院校的教学实践中起着重要作用, 且相关的科学研究及教学对其需求量较大, 因此本文介绍了一种优化的蝴蝶翅脉标本制作方法, 可以很好地避免传统方法的缺点并能提高蝴蝶翅脉标本制作的效率和成功率.
1 材料
1.1 蝶翅
蝴蝶 (菜粉蝶) 完整的前后翅, 要求无损伤, 翅面鳞片无磨损.
1.2 试剂
乙酸乙酯, 84消毒液 (有效氯含量5.5%~6.5%) , 曙红溶液, 酸性品红溶液, 碱性品红溶液, 无水乙醇, 蒸馏水.
1.3 主要仪器用具
捕虫网, 毒瓶, 解剖镜 (Nikon Smz 745T) , 解剖针, 镊子, 勾线笔, 培养皿, 表面皿, 胶头滴管, 滴瓶, 染色盘, 吸水纸, 塑封膜 (厚度0.08 mm) , 标签纸, 塑封机.
2 制作方法及注意事项
2.1 采集
用捕虫网捕捉蝴蝶, 由于蝴蝶翅很脆弱, 故在捕捉时要小心, 以防翅受到损伤.然后将其放到三角袋内, 将三角袋放入毒瓶以毒死蝴蝶并制作成干制标本[6].
2.2 取材
选取前后翅皆完整的蝴蝶标本, 用镊子将体躯右侧的前后翅从翅基部取下备用.由于前后翅由翅缰和翅缰钩相连, 为保证其完整, 故在夹取时应用镊子将前后翅从翅基部一同取下.注意不要碰到翅的边缘, 以防损坏.如若取的翅上带有胸部表皮或肌肉, 此时应用解剖针剔除.另外, 取翅时一定要用镊子夹取蝴蝶同一侧的前后翅, 留出另外一侧的前后翅作对照.
2.3 漂白
将取下的蝴蝶前后翅放入盛有稀释一倍84消毒液的培养皿中, 根据翅的大小, 浸泡10~20 min, 可见翅面有明显的褪色现象.待完全褪色之后, 用勾线笔在翅面上轻轻一刷, 鳞片即可脱落.此处注意漂白时间不可过长, 以免影响翅的韧性.
2.4 清洗
将漂白好的翅放入盛有蒸馏水的培养皿中, 解剖镜下观察, 用勾线笔轻轻刷去翅表面残留的鳞片.由于翅的边缘很薄, 要由翅基部向外缘方向刷, 越往外用力应越轻.在解剖镜下观察翅上是否还有未刷掉的鳞片, 要特别注意基部, 用蒸馏水洗去刷掉的鳞片, 最后得到干净透明的翅[5].更换蒸馏水, 再清洗2遍, 以去除残留的84消毒液, 以免影响染色效果.注意更换蒸馏水时, 不要移动翅, 而是用吸水纸将原来的蒸馏水吸干, 再加入新的蒸馏水.
2.5 染色
配制曙红溶液、酸性品红溶液、碱性品红溶液, 将清洗好的透明的翅分别放入盛有曙红溶液、酸性品红溶液、碱性品红溶液的培养皿中.碱性品红溶液染色10 min, 可使翅完全着色, 染色深, 翅脉不清晰;酸性品红溶液染色10 min, 能将翅染为桃红色, 染色适中, 翅脉清晰;曙红溶液需染色5~6 h, 翅脉橙红色, 颜色较轻, 翅脉清晰.可根据不同蝴蝶种类选取适合的染色液.本文制作时选取的是酸性品红溶液.
2.6 漂洗
将染色完毕的翅取出, 放入盛有蒸馏水的表面皿上, 在解剖镜下用勾线笔轻轻的刷洗, 目的是将翅上多余的染液洗去, 然后用吸水纸吸干蒸馏水, 再用胶头滴管往表面皿上滴加蒸馏水, 多次洗刷, 把多余的染液去除干净 (蒸馏水不再变色即可) .
2.7 脱水
将漂洗干净的翅, 采用逐级脱水的方法依次放入盛有30%、50%、70%、90%和无水乙醇的表面皿中, 各浸泡大约1 min, 脱去多余水分.
2.8 透明及整姿
透明试剂选用环保透明剂[7].将脱水后的翅放入盛有环保透明剂的表面皿上, 浸泡1~2 min, 使翅透明.同时在解剖镜下将前后翅展平, 避免出现皱褶, 如果出现了皱褶, 千万不要用镊子或解剖针, 一定要用勾线笔慢慢地刷洗, 使其展平.
2.9 封片
将处理好的右侧前后翅用勾线笔轻轻地摆放在塑封膜右侧, 未处理的左侧前后翅放在塑封膜的另一端.同时将制作好的标签摆放整齐, 待翅自然晾干之后放入预热好的塑封机内塑封, 蝴蝶翅脉标本就制作完成了.
注意塑封之前一定要等翅在塑封膜上的水分自然挥发掉, 不可用吸水纸等将水分吸干, 避免塑封后标本内部有杂质;另外塑封时, 要留意并调整好未处理翅的位置, 避免塑封时, 未处理的翅随意滑动, 影响美观.
3 去鳞片剂84消毒液、环保透明剂及塑封膜封片的性能、优点及使用注意事项
3.1 去鳞片剂84消毒液性能、优点及注意事项
84消毒液 (84 disinfectant) 是一种无色或淡黄色液体, 主要成分是次氯酸钠 (Na Cl O) , 有效氯含量为5.5%~6.5%, 被广泛运用于宾馆、旅游、医院、食品加工行业、家庭等的卫生消毒.84消毒液氯含量较低, 刺激性气味小, 市售的84消毒液还含有淡淡的清香, 腐蚀性较浓硫酸、浓盐酸轻, 对人体危害小.而且其易获取, 各大超市均有售卖, 使用方便, 无需进行实验室溶液的配置.其中含有的Na CIO具有漂白性, 水解可生成同样具有漂白性的次氯酸 (HCIO) , 有一定的腐蚀性和氧化性, 可用于取代浓硫酸、氢氧化钾等腐蚀性强的强氧化剂.
84消毒液中氯含量虽低, 且无刺激性气味, 但并不是没有腐蚀性, 所以在使用时仍是要使用手套, 避免接触皮肤;戴好口罩, 避免吸入有害气体.
由于84消毒液的失效原理与消毒原理相同, 因此盛有消毒剂的容器必须加盖盖好, 避光密封保存, 否则生成的HCIO会分解 (2HCIO=2HCI+O2) , 达不到我们所需的漂白效果;稀释时, 勿用50℃以上的热水, 才能更好的发挥作用.
3.2 环保透明剂替代二甲苯
本文介绍的蝴蝶翅脉标本制作方法中使用环保透明剂替代二甲苯作为透明剂, 它对人体无毒无害, 绿色环保.同时还能避免使用二甲苯时翅硬化而容易受到损坏.但是也有一些不足之处, 环保透明剂挥发速率低, 在封片之前需要等待较长时间翅才可自然晾干.
3.3 塑封膜封片的优势
常规的装片制作需要载玻片和盖玻片, 这些玻璃制品做成的标本容易破碎, 而塑封标本是封于塑料膜内的, 便于携带, 不易摔碎, 可长期保存.而且直接封于膜内的标本清晰、美观, 无需使用加拿大胶等封片剂来填充, 避免了有毒试剂对人体损害.并且塑封膜的尺寸规格多, 既适用于小型的蝴蝶, 也适用于于中、大型的蝴蝶翅脉标本的制作, 规避了玻片标本受载玻片和盖玻片尺寸限制的弊端.
4 总结
本文对蝴蝶翅脉标本制作过程中的去鳞片剂、染色试剂、封片技术等进行了探索, 对蝴蝶翅脉标本的制作方法进行了优化, 并通过多次实验探索找到了最佳的去鳞片剂浓度为稀释一倍的市售84消毒液, 发现了最佳染色剂为酸性品红溶液可使染色牢固且翅较透明, 同时使用环保透明剂替代二甲苯做为透明剂, 使用塑封膜封片从而避免使用加拿大胶等有毒性的封片剂.
使用此优化方法制作的蝴蝶翅脉标本具有省时省力、损坏率低、成功率高、环保无毒害、便于携带、可长久保存等优点, 可以满足教学和科学研究工作的需求.
参考文献
[1]陆秀君, 何运转, 董建臻, 等.普通昆虫学教学改革的实践探究[J].高等教育学院, 2003 (3) :71-73.
[2]刘长仲, 王国利.植物保护专业《普通昆虫学》教学方法探讨[J].甘肃农业大学学报, 2000, 35 (4) :477-479.
[3]曹峰.蝴蝶翅脉标本的简易制做方法[J].生物学通报, 2002, 37 (7) :29.
[4]张贞材.鳞翅目昆虫翅制片方法介绍[J].昆虫知识, 1958 (5) :42-43.
[5]陆秀君, 杨向东, 马丽娟, 等.鳞翅目昆虫翅脉塑封标本的制作方法[J].江苏农业科学, 2010 (5) :477-479.
[6]郭红香.处死昆虫的五种方法[J].生物学教学, 2000 (6) :36.
[7]孙颖慧, 孙永岭.环保封片剂在小蛾类外生殖器制片中的应用[J].德州学院学报, 2017, 33 (4) :18-21.
