椎间盘退化性疾病是导致腰背部疼痛的主要原因之一 ,骨髓核细胞的可替代表型细胞存活减少、代谢活性降低、基质产生减少和营养不良性钙化可能成为椎间盘退行性病变的关键促进因素。
1、材料与方法
1. 1材料 24 只 Wistar 大鼠 ( 由潍坊医学院实验动物中心提供 ), 雌雄不拘 , 体重在 (200±20)g 左右。所有大鼠随机分为实验组、模型组、空白组 , 每组 8 只 , 模型组和实验组每只大鼠 L3~4, L4~5椎间盘行针刺手术 , 空白组不进行手术干预。
1. 2手术方法 从大鼠的前外侧入路开始 , 手术分离肌肉筋膜等 , 露出椎间盘视野 , 将 16 号针头刺破椎间盘纤维环 ,针头穿刺的深度为 5 mm, 针头停留的时间在 5 s 左右 , 使椎间盘纤维环受到损伤而不使髓核损伤 , 让损伤随着时间进行缓慢的退行性变化。实验组动物在完成椎间盘退变建模后直接于同一切口通过侧后方入路显露 L3~4, L4~5椎间盘 ,并行椎间盘内注射丹参注射液(正大青春宝药业有限公司 )。第 4、6、8、12 周时 , 分别处死各组大鼠制备椎间盘切片。免疫组织化学法测定 TGF-β1的表达 , 彩色图像分析软件测量平均光密度值 ( 平均光密度及阳性细胞比值 ), 进行统计学分析。
1. 3统计学方法 实验数据均采用 SPSS20.0 软件进行统计分析。计量资料以均数 ± 标准差 (x-±s) 表示 , 采用t检验。P<0.05 为差异具有统计学意义。
2、结果
2. 1组织学观察 实验组与空白组髓核细胞分布比较均匀 ,细胞核呈圆形没有发现或仅发现有轻微的分离 , 成纤维细胞镜下观察为正常状态 ；模型组髓核细胞数量明显减少 , 少量残留的髓核细胞呈聚集状态 , 髓核细胞的胞核形状发生不规则改变 , 纤维环与髓核的交界地区出现分离现象 , 纤维环出现破裂 , 并且破裂的纤维环向内挤压髓核细胞。
2. 2TGF-β1表达结果 模型组与空白组比较 , TGF-β1表达明显减少 ；实验组与模型组比较 , TGF-β1表达明显增加 ,但实验组与空白组比较 , TGF-β1表达较空白组减少 , 差异均有统计学意义 (P<0.05)。病理学和统计学结果见表 1。
3、讨论
椎间盘的每个椎骨连在一起具有承担负荷功能 , 并且保持了脊柱的灵活性 , 健康人的椎间盘是由外围纤维环和中央髓核细胞以及上方和下方的软骨终板组成。髓核由髓核细胞构成 , 在椎间盘基质的退化和维持中扮演关键性角色。TGF-β1是转化生长因子超家族中的一员 , TGF-β1与骨组织的代谢联系最为紧密。在骨组织疏松或发生骨折等疾病进程中 ,TGF-β1表达呈下降趋势。TGF-β1作为骨形成过程中的重要环节 , 其可使破骨细胞活动性能下降 , 成骨细胞作用增强 ,促进骨的形成。丹参具有消炎、止痛、改善病变局部微循环的作用, 椎间盘退变过程中发生局部缺氧和微循环灌注不足的现象 , 因此椎间盘内注射丹参注射液可改善椎间盘局部缺氧及循环灌注不足 , 并促进 TGF-β1表达增强 , 促进骨的再生 , 在临床的应用中具有现实意义。
