孕妇金花片由栀子、白芍、金银花等9味中药材提取精制而成，具有清热、安胎的功效。临床主要用于孕妇头痛、晕眩、口鼻生疮、咽喉肿痛等。栀子苷是栀子的主要成分之一，具有泻火除烦、清热利尿、凉血解毒等功效[1].白芍的主要成分为芍药苷，临床上白芍组方常用于治疗多种腹痛以及肋痛、痛经、肢体痉挛痛、头痛等，具有直接镇痛作用[2].笔者采用反相高效液相色谱法，研究孕妇金花片中栀子苷和芍药苷的含量测定方法，为孕妇金花片的质量控制和评价提供参考依据。
1 仪器与试剂
Dionex-P680高效液相色谱仪；上海科导超声仪器有限公司5200H型超声波清洗器；AT-201电子分析天 （d=0.01mg,瑞士）；孕妇金花片 （自制）；栀子苷对照品，供含量测定用，中国药品生物检定所，批号：110749-200309;芍药苷对照品，供含量测定用，中国药品生物检定所，批号：0736-9508;乙腈为色谱纯；水为重蒸馏水 （自制）；甲酸等其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1溶液的配制溶液的配制参照文献 [3~6]进行。
①对照品溶液：取经五氧化二磷减压干燥器中干燥36h的栀子苷对照品和芍药苷对照品适量，分别精密称定，加甲醇制成每1mL含栀子苷90μg、芍药苷50μg的溶液。
②供试品溶液：取孕妇金花片10片，研匀，取约1g,精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇50mL,密塞，轻轻振摇，称定重量，超声处理50min,放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，振摇，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液即得。
③阴性对照溶液：按孕妇金花片处方比例和工艺，制备不含白芍和栀子的阴性样品。按供试品溶液制备方法制得阴性对照溶液。
2.2色谱条件色谱柱：
Aglient XDB-C18柱 （4.6mm×250mm,5μm）；流动相：乙腈-0.1%甲酸 （12.5∶87.5）;流速：1.0mL/min;柱温：30℃;检测波长：236nm[7~9].
2.3系统适用性试验按照上述色谱条件，取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μL进样，记录色谱图。理论塔板数按栀子苷峰计算不低于11000,按芍药苷峰计算不低于7000,分离度均大于1.5,峰形对称，阴性无干扰。结果见图1、2、3.
2.4标准曲线的制备取两种对照品适量，分别精密称定，加甲醇制成浓度为180μg/mL的栀子苷和100μg/mL的芍药苷的混合对照品溶液，精密量取上述对照品溶液1、2、4、6、8、10mL分别置于10mL量瓶中，加甲醇定容，摇匀。分别精密量取上述对照品溶液10μL,各进样2次，按上述色谱条件测定。以峰面积平均值为纵坐标 （Y），以进样量为横坐标 （X）绘制标准曲线。结果表明，栀子苷在0.18~1.8μg范围内线性关系良好，回归方程为Y=12.982 X-0.0634,r=0.9999;芍药苷在0.10~1.0μg范围内线性关系良好，回归方程为Y=23.088 X-0.0472,r=0.9999.
2.5精密度试验精密吸取同一对照品溶液，连续进样6次，测定，结果栀子苷的峰面积RSD为0.6%,芍药苷的峰面积RSD为0.9%.
2.6稳定性试验取同一供试品溶液，按上述色谱条件，分别于0、2、4、8、12、24h测定峰面积。结果栀子苷的峰面积RSD为1.2%,芍药苷的峰面积RSD为0.7%,试验结果表明，供试品溶液在24h内稳定性良好。
2.7重复性试验按照含量测定的方法，对同一样品 （批号：131201）测定6次，结果栀子苷和芍药苷含量平均值分别为4.3436、2.4047mg/g,RSD分别为1.8%、1.3%.
2.8加样回收试验取已知含量的孕妇金花片样品 （批号：131201）细粉6份，每份约0.4g,精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入对照品溶液20mL,精密加甲醇30mL,按2.1.2项供试品溶液制备方法制备，分别按上述色谱条件测定。结果 （见表1、2）表明本法回收率为分别为99.88%、99.39%,RSD分别为1.5%、1.3%.
2.9含量测定按照上述含量测定方法，测定三批孕妇金花片的含量，采用外标法计算含量，结果见表3.
3 结论
中药及其制剂很多以栀子苷或芍药苷为含量测定指标，流动相多采用甲醇-水、乙腈-水、乙腈-磷酸等系统[6~9].笔者采用反相高效液相色谱法，同时测定孕妇金花片中栀子苷和芍药苷的含量，对测定波长和流动相等条件进行了实验考察，结果流动相为乙腈-0.1%甲酸 （12.5∶87.5），可使栀子苷和芍药苷与杂质峰分离情况最佳；检测波长为236nm,栀子苷和芍药苷的检测灵敏度均较高。此方法准确可靠、重现性好，可用于孕妇金花片的质量控制和评价。
[参考文献]
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[3]黄弦，左月明，罗光明，等.多指标评价栀子超声提取工艺 [J].时珍国医国药，2013,24（7）:1568~1571.
[4]刘燕，吕东，林瑞超，等.关于测定栀子中栀子苷含量方法的探讨 [J].中国药品标准，2002,3（1）:55~56.
[5]林庆义，汪氏琼.白芍超声提取工艺研究 [J].中药材，2002,25（10）:737~739.
[6]周欣，杨文业.高效液相 色 谱 法测定 丹栀 苷 逍遥丸中栀子苷、芍药苷、苷丹皮酚和甘草酸含量 [J].药物分析杂志，2005,25（7）:784~787.
