发热伴血小板减少综合征( Severe fever withthrombocytopenia syndrome,SFTS) 是一种新出现的出血热,其首个病例出现在中国河南省农村地区。
SFTS 是由发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒( SFTSV) 感染所致,该病毒是一种新型的布尼亚病毒科白蛉病毒属病毒。自 2010 年首次报道以来,中国已有 11 个省份发现大约 2500 例病例,平均病死率为 7. 3%.SFTS 主要以发热和呼吸道或消化道症状急性起病,随后出现血小板和白细胞数进行性下降[1].2014 年 10 月,湖南省疾病预防控制中心( CDC) 从省人民医院送检的一份发热伴出血症候群病例的血清标本中检出 SFTSV 核酸阳性,综合病例临床表现和实验室检查结果,该病例确诊为SFTS 病例,为湖南省首例病例。为了解该例病例发病经过和感染来源及其生活居住地人和动物的SFTSV 感染状况,对病例和其生活、生产活动的环境开展了详细的流行病学调查,现将调查结果分析报告如下。
1 材料与方法
1. 1 诊断标准 依据卫生部制定的《发热伴血小板减少综合征防治指南( 2010 版) 》( 《指南》) 中“发热伴血小板减少综合征诊疗方案”的标准。
1. 2 流行病学个案调查 根据《指南》中“发热伴血小板减少综合征流行病学调查方案”要求,采用方案中的流行病学个案表开展调查,通过反复访谈病例家属、邻居、诊治医生等相关知情人员、查阅病历资料等方式详细了解病例发病前活动情况、发病经过及临床特征。
1. 3 病例搜索 访谈病例居住的月星村 3、4 组及病例摘板栗地所在的道塘村村民近 1 年来有无发热伴出血症状; 同时到病例所在地镇卫生院通过查阅近 1 年门诊日志、住院病例、血常规检查结果、访谈医生等方式查找是否有发热伴血小板减少病例。
1. 4 血清流行病学调查 依据知情同意原则,采取方便抽样方法对月星村 3、4 组及病例摘板栗地所在的道塘村村民、和村民饲养的牛羊采集血清标本,开展抗 SFTSV IgM、IgG 检测,共计采集人血清 77份,羊血清 21 份,牛血清 3 份。
1. 5 媒介生物调查 现场查看病例居住、活动环境状况,通过“布旗法”捕捉游离蜱,用镊子直接夹取牛羊身上的寄生蜱,将蜱放置在试管中,送实验室开展 SFTSV 核酸检测。
1. 6 实验室检测方法
1. 6. 1 血清 IgM、IgG 检测 采用酶联免疫吸附实验( ELISA) 方法,检测试剂为无锡鑫连鑫生物医药科技有限公司生产的 SFTSV 抗体检测试剂盒( IgM 抗体检测试剂盒生产批号:20141015,有效期:2015 年4 月14日; IgG 抗体检测试剂盒生产批号:20141014,有效期:2015 年 4 月 14 日) .所有人、动物血清使用相同的试剂盒进行 IgG、IgM 检测。具体操作步骤为: 对应 96孔板分别加入阴、阳性对照和待检样品,100 μl/孔,37 ℃ 孵育 30 min,洗板 4 次,加入 HRP 标记重组布尼亚病毒蛋白工作液100 μl/孔,37 ℃孵育30 min,洗板4 次,加入显色液,37 ℃ 避光孵育 10 min,加入终止液50 μl / 孔,450 nm 波长下测量各孔 A 值。结果判断标准: 以阴性对照平均 A 值 ×2. 1 为 cutoff 值,待检样品A 值≥cutoff 为阳性。
1. 6. 2 核酸检测方法 采用反转录 - 聚合酶链反应( RT-PCR) 方法,检测试剂为中山大学达安基因股份有限公司生产的 SFTSV 核酸检测试剂盒( 生产批号:2014004,有效期:2015 年6 月3 日) .具体操作步骤为: 蜱虫标本冰上碾磨后,12 000 离心10 min,取上清 140 μl 应 用 QIAamp viral RNA Mini kit( QIAGENE,Germany) 进行核酸提取。核酸扩增应用SFTSV 核酸检测试剂盒进行实时荧光定量反转录 -聚合酶链反应 ( Real Time Fluorescent QuantitativeReverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,rRT-PCR) 扩增。 具体体系配制与反应参数设置参照试剂盒说明书进行。结果判断: 在阴性、阳性及内部质控成立的条件下,样品扩增曲线在 FAM、VIC 检测通道均呈对数增长,且 Ct 值 <35 判断为阳性。
2 结果
2. 1 病例基本情况 罗 × × ,女,59 岁,农民,户籍新化县 YJ 镇月星村,现住新化县 SS 乡乡政府旁。该病例常年在家务农,家中未养牛、羊,仅养几只鸡。患者在家与老伴、11 岁的孙子一起生活。
2. 2 发病及就诊情况 病例在 10 月 1 日前一直在家务农。10 月 1-5 日至贵州省松桃县女儿家游玩。期间,4 日去凤凰旅游时自感全身乏力、酸痛,自服安乃近未见好转; 5 日疼痛加重,家属陪同其前往松桃县人民医院诊治,医生予患者抗感冒退热治疗,具体药物不详,仍未见好转; 6 日开始出现发热( >38 ℃) ,遂在自驾车返回湖南途中入怀化市第二人民医院住院诊治,入院完善相关检查,考虑为“上呼吸道感染? 肺炎?”,予以退热、补液等对症治疗,患者疼痛有所缓解,但仍有发热,后回新化; 10日下午 6 时病例发热加重,体温 39 ℃,最高时达到40 ℃ ,送入新化县人民医院治疗,相关检查示: 白细胞 2. 5 ×109/ L,血小板 24 × 109/ L,经医院抗感染等对症处理后无好转; 11 日转入省人民医院急诊科并收治入院,体温 39. 5℃,白细胞 3. 56 × 109/ L,血小板 34 × 109/ L,诊断为: 严重脓毒症、重症中毒性心肌炎、中毒性肝炎、凝血功能障碍、消化道出血,给予抗感染、抗病毒等治疗,病情无明显改善。湖南省人民医院为国家十二五“艾滋病与病毒性肝炎等重大传染病防治”科技重大专项“传染病监测技术平台”项目“五大症候群”监测哨点医院,病例症状符合“发热伴出血症候群”,遂于 10 月 14 日采集病例血清送湖南省 CDC 检测,15 日省 CDC 实验室检测结果显示肾综合征出血热 IgM、IgG 抗体阴性,16日检测结果显示 SFTSV( 新型布尼亚病毒) 核酸阳性,IgM 抗体阳性,IgG 抗体未检测,根据《指南》确诊为 SFTS.16 日晚患者意识模糊,病情危重,转入ICU 隔离治疗。经湖南省人民医院积极救治,患者病情逐步好转,于 12 月中旬痊愈出院。病例病程经过见图 1.