S-100A4蛋白为S100钙离子结合蛋白超家族成员之一,是由101个氨基酸组成的。S100蛋白参与调解细胞的结构、形态、增殖、信号转导、钙依赖信号调解及细胞骨架的组织等。不同的肿瘤组织其S100蛋白表达差异明显,但大部分定位于染色体的1q21区域,如重叠、易位、缺失等,进而造成S-100基因的表达异常。近几年来国内外文献报道S-100A4蛋白在肺癌、甲状腺癌、膀胱癌、乳腺癌等多种肿瘤中高表达,并与其临床分期、转移及预后关系密切。本文研究通过检测胃癌组织和正常胃黏膜中S-100A4的表达,探讨S-100A4与胃癌发生、发展的相关性,以便为胃癌患者的预后提供有效的评价指标。
1、 研究材料与方法
1.1 研究对象
收集2010年8月~2011年5月山东省千佛山医院存档的胃癌患者的临床手术标本,并统计患者资料。患者的统计资料包括以下方面:患者的性别,年龄,原发肿瘤的大小,肿瘤的组织学类型,分化程度、浸润深度,淋巴结转移及临床病理分期。
1.2 试剂及方法
抗S-100A4兔抗人多克隆抗体(0.1 mi)购于北京博奥森生物技术有限公司,其浓度为1B500;SP试剂盒同样购于北京博奥森生物技术有限公司。按照SP试剂盒说明书的操作步骤,采用常规SP法检测,以说明书中提供的阳性切片为对照,PBS代替一抗作为阴性对照,细胞核及胞浆中黄色及棕色颗粒即可认为S-100A4蛋白表达阳性,颜色为黄色,无色(-)为阴性;浅黄色(±)为弱阳性;黄色(+)为阳性;棕黄色(++)强阳性,对照组胃癌正常黏膜组织亦根据染色强度进行评分,染色结果见附图。
1.3 统计学处理
应用SPSS 17.0 for windows对数据进行统计分析,ｘ2检验或作相关分析,以P<0.05为差异有统计学意义。
2、 结 果
S-100A4在胃癌组和正常胃黏膜组中的表达,见表1。S-100A4的表达与胃癌患者肿瘤相关参数的关系,见表2。
2.1 S-100A4蛋白在不同部位的表达
本试验82例胃癌组织中有43例S-100A4蛋白表达,阳性率52.4%(43/82);82例癌旁正常组织标本中有3例S-100A4表达,其阳性率为3.6%(3/82),胃癌组织中S-100A4蛋白表达阳性率显著高于胃癌正常黏膜,二者相比差异有统计学意义(P<0.05)。
2.2 胃癌组织中S-100A4蛋白表达与临床病理间的关系
本实验在对31例无淋巴结转移的胃癌组织中,S-100A4蛋白表达5例,阳性率为16.13%(5/31),在有淋巴结转移的51例胃癌组织中,有38例S-100A4蛋白表达阳性,其阳性率为74.51%(38/51),差异具有统计学意义(ｘ2=26.348,P<0.05 );在对肿瘤侵蚀深度为T1+T2的31例胃癌组织中,S-100A4蛋白表达的为4例,阳性率为12.90%(5/30),在对肿瘤侵蚀深度为T3+T4的51例胃癌组织中,有39例S-100A4蛋白表达阳性,其阳性率为76.47%(39/51),差异具有统计学意义(ｘ2=31.238,P<0.05);在临床分期中,判定为Ⅰ+Ⅱ期的30例胃癌病例中有5例S-100A4蛋白的表达,阳性率为16.67%(5/30),Ⅰ+Ⅱ期的52例胃癌组织中38例阳性,阳性表达率73.08%(38/52),差异有统计学意义(ｘ2=24.273,P<0.05);在36例高中度分化的胃癌组织与46例低分化胃癌组织中,差异无统计学意义(P=0.696);在60例男性病例与22例女性病例中,差异无统计学意义(P=0.554);患者年龄<60岁的17例胃癌与患者年龄\60岁的65例胃癌组织相比,差异也无统计学意义(P=01554);在肿瘤直径<50 mm的27例胃癌与肿瘤直径\50 mm的55例胃癌组织相比,差异也无统计学意义(P=0.05)。
3、 讨 论
目前,胃癌的全球发病率居恶性肿瘤首位;我国胃癌的死亡率居恶性肿瘤的第一位,90%以上为中晚期癌症,术后5年生存率仅为30%~40%。S-100A4蛋白在多种肿瘤中表达升高,既往研究表明在50%~70%的胃癌病灶中可检测到S-100A4蛋白表达,而正常胃黏膜很少表达。本文用S-P法检测S-100A4的表达,发现胃癌组织中阳性率为52.4%,在正常胃黏膜组织中表达率为3.6%(P<0.05),证实了与本文研究一致,同时本文研究显示在临床分期为Ⅰ+Ⅱ期的早期胃癌组织中,S-100A4阳性率为16.67%(5/30),但在临床分期为Ⅰ+Ⅱ期的晚期胃癌组织中,则有73.08%(38/52)的高表达。说明S-100A4表达升高可能与胃癌的浸润、转移有关。
近年来大量研究表明,S-100A4蛋白必须通过与其他癌基因的相互作用才能引起细胞恶变,进而引起肿瘤的发生,肿瘤抑制因子p53是一种转录因子,能够调控多种基因的表达。Sherbet等和Grigoria等的研究发现S-100A4能够与P53蛋白结合(主要是P53蛋白C终端的调控区),通过蛋白激酶C抑P53蛋白全长的磷酸化反应,从而使P53丧失细胞周期中G1/S限制点的检测功能,使DNA已发生突变的细胞进入S期,使细胞不受G2/M限制点的检测即进入M期,造成细胞的转录、翻译发生异常,导致细胞过度分裂,使其发生恶变。本研究中S-100A4的表达与肿瘤细胞的分化程度无关,其差异可能与研究的样本量偏小及取材有关,但是Ninomiya等的研究发现S-100A4的表达与肿瘤细胞的分化程度呈负相关,所以S-100A4蛋白表达水平与胃癌的分化程度的关系有待进一步探讨。
S-100A4蛋白的表达随浸润深度、肿瘤大小及淋巴结转移的增加而升高(P<0.05),这与Kimura等研究肺癌和Daｘies等研究膀胱癌组织中S-100A4蛋白表达的结果一致。
综上所述,胃癌组织中S-100A4表达明显高于正常组织,随着肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移及临床分期的增加阳性表达率明显升高,说明S-100A4与肿瘤的发生、发展具有一定的相关性,但其详细机制仍需进一步研究。这不仅对胃癌演变及判断预后具有重要意义,也可作为新的生物标志物及治疗胃癌浸润转移的潜在靶目标。
