在病理科日常工作中,病理医师对送检标本取材后,病理技师需将待检标本进行固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色、封片等步骤,以上总称为病理制片。其中,透明与染色两步操作中均需使用透明剂对标本进行处理,透明效果直接影响制片质量。二甲苯是常用的组织透明剂,但因其毒性、刺激性气味及环境污染等弊端,均需一种替代产品。近年来,各医院病理科正逐步使用一种新型环保生物组织透明剂(TO试剂),笔者结合本科室使用该试剂的效果介绍如下。
1、材料与方法
1.1材料选取
2009年1月—2012年12月临床送检标本,包括脑、眼球、甲状腺、扁桃体、淋巴结、肾脏、乳腺、骨、软骨、食管、胃、肠、子宫等组织,TO试剂由上海宏兹实业有限公司生产提供,二甲苯由成都市科龙化工试剂厂生产提供。
1.2方法
1.2.1组织处理
按常规程序进行固定、脱水、透明、浸蜡来处理组织。其中,透明过程用TO试剂Ⅰ、TO试剂Ⅱ和二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ进行对照。组织包埋、切片后,染色中同样使用TO试剂Ⅰ、TO试剂Ⅱ和二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ进行对照。
1.2.2制片质量
把脱蜡干净、透明度好、着色适中、颜色鲜亮的切片划归为优质片,其次为良好片,再次为差片。
1.3统计学方法
应用SPSS17.0统计软件将两种试剂制片各级制片数进行比较,经检验两种试剂差异无统计学意义(P>0.05)。
2、结果
将10 000张切片进行比较后,两种试剂制片质量见表1。
3、讨论
二甲苯为无色透明液体,与乙醇、液状石蜡、氯仿等可以互溶,沸点为137~140℃,易挥发,有刺激性气味,为中等毒性物质,具有一定致癌性,可对环境造成一定污染。二甲苯结构中含有苯环,属于芳香烃类化合物,长期处于二甲苯环境中可对机体产生危害,二甲苯可经皮肤、呼吸道、消化道吸收,蓄积于肾脏、骨髓等器官。轻症造成自主神经功能紊乱、造血功能下降,重症可致再生障碍性贫血等。病理科工作人员长期暴露于二甲苯环境中,尤其是在快速石蜡制片中,二甲苯需要在加热条件下使用,更加快了二甲苯的挥发,极易引发以上疾病,造成职业性损害。基于以上原因,研究一种新型无毒试剂替代二甲苯成为一项课题,有研究报道松节油替代二甲苯,但单独使用松节油透明效果远差于二甲苯,并且长时间使用造成松节油黏稠,而不易洗脱。
TO试剂是一种新型生物组织透明剂,其主要以醇类为稀释剂,不含芳香烃类化合物,不产生对人体有害物质,对环境也不造成污染。组织在梯度乙醇脱水后进入浸蜡环节,但乙醇与石蜡不相溶,则乙醇与石蜡间需要一种溶剂作为“桥梁”,该试剂能够与乙醇及液态石蜡互溶,起到“桥梁”作用。TO试剂与二甲苯均对组织有收缩作用,本研究中发现,只要控制透明时间,作用时间适当,TO试剂对组织的收缩作用不致影响组织正常结构。
TO试剂能够很好溶解制作切片组织中的石蜡,因此,能替代二甲苯用于石蜡切片染色前的组织脱蜡。制作的病理切片组织细胞结构好、核质分明、能够较好显示出细胞及组织结构。在使用过程中需注意以下几点:第一,脱水过程中,乙醇浓度应由低到高,根据组织大小、厚薄调整脱水时间。第二,初次使用TO试剂时应同时更换无水乙醇及石蜡。第三,染色过程中切片脱蜡可适当使用微波炉加热切片,以提高脱蜡效果。
以上研究表明,在病理技术工作中该新型环保生物组织透明剂能够替代二甲苯,病理切片优良率较高,能够达到临床病理诊断和科研要求,同时也符合实验室环保要求及减少病理工作者身体损害。
参考文献:
[1] 王伯沄.病理学技术[M].北京:人民卫生出版社,2000:78-79.
[2] 中华人民共和国卫生部.工业企业设计卫生标准[M].北京:人民卫生出版社,1979:11-12.
[3] 丁文清,潘小川.室内污染物与白血病关系研究进展[J].环境与健康杂志,2006,23(1):83-86.
[4] 詹彦平,张云.松节油代替二甲苯透明剂制片探讨[J].实用医技杂志,2007,14(16):2 256.
[5] 梁英杰,罗灿峤,董愉,等.新型生物组织透明剂代替二甲苯在病理制片技术中的应用研究[J].2009,16(3):58-59.
[6] 凌启波,梁英杰.HE制片质控要求[J].临床与实验病理学杂志,2000,16(4):333.
